【摘要】：TALEN(transcription activator-like effector nuclease)打靶是一種定向敲除基因技術(shù),利用該技術(shù)能解決目前在斑馬魚體內(nèi)難以進(jìn)行基因敲除的難題。Klhl31是本實驗室鑒定的人類心臟發(fā)育候選基因,且目前國內(nèi)外尚無斑馬魚Klhl31敲除品系。為了在斑馬魚的整體水平鑒定Klhl31的生物學(xué)功能,我們利用TALEN打靶技術(shù)建立斑馬魚Klhl31基因敲除品系。酶切驗證的結(jié)果顯示,注射了TALEN表達(dá)質(zhì)粒的胚胎在酶切位點處發(fā)生了基因突變,該突變破壞了酶切位點導(dǎo)致酶切出現(xiàn)陽性結(jié)果,證明了TALEN打靶的有效性。對F0代突變體成魚的篩選過程中,經(jīng)酶切驗證,同樣出現(xiàn)了陽性結(jié)果。這些結(jié)果說明用TALEN這種技術(shù)成功敲除了斑馬魚Klhl31基因,獲得了Klhl31基因敲除的嵌合體斑馬魚。
[Abstract]:TALEN (transcription activator-like effector nuclease) targeting is a directed knockout technique, which can be used to solve the difficult problem of gene knockout in zebrafish. Klhl31 is a candidate gene for human heart development identified by our laboratory. There are no zebrafish Klhl31 knockout lines at home and abroad. In order to identify the biological function of Klhl31 at the whole level of zebrafish, we used TALEN targeting technique to establish the Klhl31 gene knockout line of zebrafish. The results of restriction endonuclease analysis showed that the embryo injected with TALEN expression plasmid had a gene mutation at the restriction site, which destroyed the restriction site and led to the positive result of restriction endonuclease digestion, which proved the effectiveness of TALEN targeting. During the screening of F _ 0 mutant, the positive results were also detected by enzyme digestion. These results indicated that the Klhl31 gene of zebrafish was successfully knocked out by TALEN technique and the chimeric zebrafish with Klhl31 gene knockout was obtained.
【作者單位】： 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院蛋白質(zhì)化學(xué)及魚類發(fā)育生物學(xué)教育部重點實驗室心臟發(fā)育研究中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81170229,81370451,31472060,81170088) 湖南省研究生科研創(chuàng)新基金(CX2011B195) 湖南省生物發(fā)育工程及新產(chǎn)品研發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心(2013-448-6)
【分類號】：Q78

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2153327