【摘要】：胭脂堿型農(nóng)桿菌GV3101已經(jīng)被廣泛用于植物遺傳轉(zhuǎn)化研究。已有的研究結(jié)果證明,農(nóng)桿菌GV3101株系含有的反式玉米素合成(trans-zeatin synthesizing,tzs)基因編碼產(chǎn)物會(huì)影響煙草細(xì)胞器的形態(tài)及細(xì)胞的生理狀態(tài)。然而,有關(guān)tzs基因?qū)z傳轉(zhuǎn)化過程外植體再生的影響研究卻少有報(bào)道。本文在前期研究工作的基礎(chǔ)上,以2種煙草、4個(gè)農(nóng)桿菌株系為組培實(shí)驗(yàn)材料,驗(yàn)證了胭脂堿型農(nóng)桿菌tzs基因產(chǎn)物的生理活性。結(jié)果表明:以外源添加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)的外植體為陽性對(duì)照,在不添加任何生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上,與GV3101菌株共培養(yǎng)的煙草外植體能分化再生,并發(fā)育成完整植株;外植體再生與GV3101攜帶的質(zhì)粒種類無關(guān);外植體與農(nóng)桿菌GV3101培養(yǎng)液共培養(yǎng)24 h,煙草再生效果較好;與GV3101株系共培養(yǎng)24 h,將外植體煙草葉片勻漿,經(jīng)親和柱分離純化后,檢測(cè)出煙草外植體葉片中高達(dá)0.78 ng/g FW-1的反式玉米素含量。菌落PCR擴(kuò)增結(jié)果證實(shí),農(nóng)桿菌GV3101株系有tzs基因序列。以上結(jié)果表明,農(nóng)桿菌GV3101株系內(nèi)的tzs基因的表達(dá)產(chǎn)物有生理學(xué)活性,能夠促進(jìn)煙草外植體再生,調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)。
[Abstract]:Cochineal Agrobacterium tumefaciens GV3101 has been widely used in plant genetic transformation. It has been shown that the trans- Zein synthesis (trans-zeatin synthesizingtzs) gene encoding product of Agrobacterium tumefaciens GV3101 strain may affect the morphology of organelle and the physiological state of tobacco cells. However, there are few reports on the effect of tzs gene on explant regeneration during genetic transformation. On the basis of previous research work, the physiological activity of tzs gene product of Agrobacterium tumefaciens was verified by using 2 kinds of tobacco and 4 strains of Agrobacterium tumefaciens as tissue culture materials. The results showed that the explants co-cultured with GV3101 strain could differentiate and regenerate and develop into intact plants on the medium without any growth regulator. The regeneration of explants was not related to the plasmids carried by GV3101, the regeneration effect of tobacco was better when the explants co-cultured with Agrobacterium tumefaciens GV3101 for 24 h, and cocultured with GV3101 for 24 h, the explants were homogenized and purified by affinity column. The content of trans zeatin in the leaves of tobacco explants was determined to be as high as 0. 78 ng/g FW-1. The results of colony PCR amplification confirmed that the GV3101 strain of Agrobacterium tumefaciens had tzs gene sequence. The results showed that the expression product of tzs gene in Agrobacterium GV3101 strain had physiological activity, which could promote the regeneration of tobacco explants and regulate cell growth.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物技術(shù)系;遼寧科技學(xué)院;
【基金】：西北農(nóng)林科技大學(xué)基本科研創(chuàng)新項(xiàng)目(Z.109021715) 國(guó)家自然科學(xué)基金(No 31400233)資助~~
【分類號(hào)】：Q943.2

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本文編號(hào)：2147122