發(fā)布時(shí)間：2018-07-15 07:54

【摘要】：[目的]獲得高效表達(dá)的類(lèi)視神經(jīng)萎縮蛋白3(OPA3-like),并分析其生物信息學(xué)功能。[方法]利用Vector NTI和ExPASy,Signal P,Plant-mPLoc等在線工具對(duì)OPA3-like蛋白基本理化性質(zhì)、信號(hào)肽、跨膜區(qū)及亞細(xì)胞定位進(jìn)行分析;構(gòu)建原核表達(dá)載體pET22b-OPA3-like、pET28a-OPA3-like、pET32a-OPA3-like并分別轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá),SDS-PAGE對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。[結(jié)果]OPA3-like蛋白是不穩(wěn)定蛋白,含有跨膜區(qū),可能位于葉綠體;原核表達(dá)表明,對(duì)于同一重組質(zhì)粒而言,融合蛋白在兩種菌中的表達(dá)量無(wú)明顯差別,其中,轉(zhuǎn)化pET28a-OPA3-like可表達(dá)20kDa的融合蛋白;轉(zhuǎn)化pET32a-OPA3-like可表達(dá)37kDa的融合蛋白,且主要都以包涵體形式存在,轉(zhuǎn)化pET22b-OPA3-like無(wú)融合蛋白的表達(dá)。[結(jié)論]轉(zhuǎn)化pET32a-OPA3-like的表達(dá)菌可以高效表達(dá)融合蛋白(37 kDa),有利于進(jìn)一步研究OPA3-like在植物中的亞細(xì)胞定位及功能。
[Abstract]:[Objective] to obtain highly expressed optic nerve atrophy protein 3 (OPA3-like) and analyze its bioinformatics function. [Methods] the basic physicochemical properties of OPA3-like protein, signal peptide, transmembrane region and subcellular localization of OPA3-like protein were analyzed by using Vector NTI and ExPASy, Signal P, Plant-mPLoc and other online tools. T28a-OPA3-like, pET32a-OPA3-like were transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) and Rosetta (DE3) respectively. The fusion protein was induced by IPTG, and the results were verified by SDS-PAGE. [results]OPA3-like protein is an unstable protein, which contains a transmembrane region and may be located in the chloroplast; the prokaryotic expression indicates that the fusion protein is two for the same recombinant plasmid. There was no obvious difference in the amount of expression in the bacteria, of which the conversion of pET28a-OPA3-like could express the fusion protein of 20kDa, and the conversion of pET32a-OPA3-like could express the fusion protein of the 37kDa, and the expression of the inclusion body was mainly in the form of inclusion body, transforming the expression of pET22b-OPA3-like non fusion protein. [Conclusion] the expression bacteria of the transformed pET32a-OPA3-like can express the fusion efficiently. Protein (37 kDa) is helpful to further study the subcellular localization and function of OPA3-like in plants.
【作者單位】： 石河子大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“番茄OPA3-like基因的功能研究”,No.31460466)
【分類(lèi)號(hào)】：Q946.1

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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