本文選題：腺病毒科感染 + 綠色熒光蛋白質(zhì)類　； 參考：《中國組織工程研究》2017年21期

【摘要】：背景:人羊膜上皮細(xì)胞具有干細(xì)胞的某些性能,可誘導(dǎo)分化為角膜樣上皮細(xì)胞,但在體外培養(yǎng)時(shí)無法示蹤,不能有效地監(jiān)測其細(xì)胞轉(zhuǎn)歸。目的:探討利用腺病毒載體將標(biāo)記基因EGFP轉(zhuǎn)染入人羊膜上皮細(xì)胞的可行性及感染效率。方法:pD C316-mC MV-EGFP腺病毒包裝后,腺病毒載體攜帶標(biāo)記基因EGFP轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人羊膜上皮細(xì)胞,并擴(kuò)增培養(yǎng),觀察轉(zhuǎn)染后人羊膜上皮細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染人羊膜上皮細(xì)胞的形態(tài)差異,并在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染基因的表達(dá),用流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞的細(xì)胞周期及EGFP陽性表達(dá)率。結(jié)果與結(jié)論:(1)多數(shù)轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選出的抗性克隆以及培養(yǎng)的克隆細(xì)胞與正常體外培養(yǎng)的人羊膜上皮細(xì)胞在形態(tài)上無顯著差異;(2)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后48 h的人羊膜上皮細(xì)胞中增強(qiáng)型綠色熒光蛋白陽性表達(dá)率最高達(dá)99.01%;(3)轉(zhuǎn)染后的人羊膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期有所減慢,說明利用腺病毒載體能將標(biāo)記基因EGFP轉(zhuǎn)染入人羊膜上皮細(xì)胞,可更直觀地觀察到人羊膜上皮細(xì)胞在體外的進(jìn)一步轉(zhuǎn)歸。
[Abstract]:Background: human amniotic epithelial cells (HMECs) have some properties of stem cells, which can induce and differentiate into keratoid epithelial cells, but can not be traced in vitro and can not effectively monitor the outcome of human amniotic epithelial cells. Aim: to investigate the feasibility and infection efficiency of transfection of labeled gene EGFP into human amniotic epithelial cells by adenovirus vector. Methods Adenoviral vector carrying marker gene EGFP was transfected into human amniotic epithelial cells cultured in vitro, and the morphological differences between human amniotic epithelial cells and untransfected human amniotic epithelial cells were observed. The expression of transfection gene was observed under fluorescence microscope. The cell cycle and EGFP positive expression rate of transfected cells were detected by flow cytometry. Results and conclusions: (1) there was no significant difference in morphology between the majority of transfected cells and the cultured human amniotic epithelial cells in vitro, and (2) 48 h after transient transfection of human amniotic epithelial cells, there was no significant difference in morphology between the cloned cells and normal human amniotic epithelial cells. The highest positive expression rate of enhanced green fluorescent protein was 99.01. (3) the cell cycle of transfected human amniotic epithelial cells slowed down. The results showed that EGFP could be transfected into human amniotic epithelial cells by adenovirus vector, and the further development of human amniotic epithelial cells in vitro could be observed more intuitively.
【作者單位】： 深圳市寶安人民醫(yī)院眼科;暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30872808,81100637) 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金項(xiàng)目(201512902216517) 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015A020212026) 廣東省中醫(yī)藥局科研項(xiàng)目(20162044) 深圳市科技計(jì)劃基金項(xiàng)目(JCYJ20140414105820176,CXZZ20140418182638764)~~
【分類號】：R3416

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2113432