發(fā)布時間：2018-07-05 20:22

  本文選題：柑橘 + cor8基因��； 參考：《湖南農業(yè)大學》2016年碩士論文

【摘要】：本課題組已經從耐寒性柑橘枳中克隆獲得一個與低溫鍛煉有關的基因,并將其命名為Ptcor8。同時發(fā)現(xiàn)該基因在金柑、檸檬等柑橘種類中具有高度同源性,而且該同源基因表達與柑橘抗寒能力大小呈現(xiàn)相同趨勢,枳最耐寒,能耐受-26℃低溫,檸檬最不耐寒,枳中的表達量是檸檬的25倍。另外研究比對不同柑橘種類中同源基因啟動子的序列發(fā)現(xiàn),枳啟動子與檸檬啟動子的同源性為88.17%,并且枳啟動子含有3個與逆境響應相關的特有調控元件。于是構建了含有啟動子和cor8基因的融合植物表達載體,用農桿菌介導的瞬時表達法,將含有不同載體的菌液注射到墨西哥萊檬葉片中,進行瞬時表達,發(fā)現(xiàn)枳啟動子對低溫響應的敏感度更高。在此條件下,將pPtcor8::Ptc-or8::YFP, pPtcor8::Clcor8::YFP, pClcor8::Ptcor8::YFP3個植物表達載體轉入到不耐寒的檸檬,并對檸檬遺傳轉化條件進行優(yōu)化,篩選出最佳組合的再生條件和篩選壓,最終得到了轉基因植株本研究取得了以下主要結果：1、將構建好的4個植物表達載體(35S::Ptcor8::YFP, pPtcor8::Ptcor8::YFP, pClcor8::Ptcor8::YFP,pPtcor8::Clcor8::YFP)采用農桿菌介導的瞬時表達法注射墨西哥萊檬葉片,YFP報告基因的熒光檢測說明枳的啟動子比檸檬啟動子在低溫下更敏感。2、對檸檬遺傳轉化條件進行優(yōu)化,在再生培養(yǎng)基中不同濃度的6-BA,卡那霉素以及除草劑進行篩選,得出了再生培養(yǎng)基為MT+0.75 mg/L 6-BA,添加75 mg/LKan或者10mg/LBastao3、將pPtcor8::Ptcor8::YFP, pPtcor8::Clcor8::YFP, pClcor8::Ptcor8::YFP3個植物表達載體轉入到不耐寒的檸檬,得到含有ppPtcor8::Ptcor8::YFP抗性芽34個,pClcor8::Ptcor8::YFP抗性芽48個,pPtcor8::Clcor8::YFP抗性芽29個,通過報告基因的熒光檢測得到成功轉入pPtcor8::Ptcor8::YFP, pPtcor8::Ptcor8::YFP, pClcor8:: Ptcor8::YFP,pPtcor8::Clcor8::YFP的檸檬植株分別是3株,4株,2株；并移栽于溫室大棚。
[Abstract]:Our team has cloned a gene related to low temperature exercise from cold tolerant citrus trifoliate orange and named it Ptcor8. At the same time, it was found that the gene had high homology in citrus species such as orange and lemon, and the expression of the homologous gene showed the same trend as the cold resistance of citrus. The trifoliate orange was the most cold tolerant, able to tolerate -26 鈩，

本文編號：2101666