本文選題：抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆 + Realtime-PCR�。� 參考：《北京工業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：本論文以大豆及其加工產(chǎn)品為對象,建立了用于快速檢測豆制品中轉(zhuǎn)基因大豆成份——抗草甘膦基因EPSPS及其表達元件的Realtime-PCR檢測法,并對市場上常見豆制品進行檢測分析。該方法的建立,可為食品監(jiān)管機構(gòu)有效的管理轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品提供理論和實驗依據(jù)和參考。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)濃度對大豆基因組DNA提取的影響:對來自三個地區(qū)的大豆樣本進行了分析,并對其中看家基因Lectin基因進行PCR反應(yīng)和凝膠電泳分析,結(jié)果顯示,0.1%以上PVP能有效的提高大豆基因組DNA提取質(zhì)量,凝膠電泳分析結(jié)果中能夠明顯看到目標(biāo)基因所在位置,條帶清晰。醬油中抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆成分檢測方法的建立:建立了利用RT-PCR反應(yīng)(SybGreen法)對醬油中提取出的基因組DNA進行檢測的方法,通過對提取出的基因組DNA進行RT-PCR檢測分析顯示,在以轉(zhuǎn)基因豆粕為原料的醬油所提取出的基因組DNA中能夠檢測到CaMv35s啟動子和Nos終止子調(diào)控元件,而外源基因EPSPS基因降解較嚴(yán)重,熔解曲線分析表明,RTPCR對轉(zhuǎn)基因的檢測獲得了很好的特異性。RT定量PCR相對于傳統(tǒng)PCR,具有快速、高通量、高選擇性、高靈敏度的優(yōu)勢,在轉(zhuǎn)基因食品的檢測領(lǐng)域具有很大的潛力。市場上常見豆制品中抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆成分的檢測:以自農(nóng)貿(mào)市場的散裝豆制品和來自超市中的袋裝豆制品共28種為檢測對象,利用RTPCR反應(yīng)對其中抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆成分進行了檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn),11種袋裝豆干類產(chǎn)品中有2種檢測到抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆CaMv35s啟動子、Nos終止子和EPSPS基因,1種檢測到抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆CaMv35s啟動子和Nos終止子。17種散裝豆制品中只有1種檢測到CaMv35s啟動子、Nos終止子和EPSPS基因。28種樣品中,在標(biāo)簽中明確標(biāo)注原料為非轉(zhuǎn)基因大豆的產(chǎn)品都未檢測出抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆成分,未標(biāo)注是否含轉(zhuǎn)基因大豆原料的產(chǎn)品中部分檢測出4種含抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆成分。
[Abstract]:In this paper, we set up a Realtime-PCR detection method for fast detection of genetically modified soybean components, glyphosate resistance gene EPSPS and its expression components in soybean products, and analyzed the common soybean products in the market. The establishment of this method can effectively manage GM production for food regulators. The effects of the concentration of polyvinylpyrrolidone (PVP) on soybean genomic DNA extraction were provided. The soybean samples from three regions were analyzed, and the PCR reaction and gel electrophoresis of the Lectin gene were analyzed. The results showed that more than 0.1% PVP could effectively improve the DNA extraction of soybean genome. The location of the target gene can be clearly seen in the analysis results of the gel electrophoresis. The method for detecting the composition of glyphosate resistant transgenic soybean in soy sauce is established: the method of detecting genomic DNA extracted from soy sauce by RT-PCR reaction (SybGreen) is established, and RT-PC is carried out by the extraction of genomic DNA. R detection analysis showed that CaMv35s promoter and Nos terminator were detected in the genomic DNA extracted from soy sauce with genetically modified soybean meal, and the exogenous gene EPSPS gene was degraded seriously. The analysis of the fusion curve showed that RTPCR obtained a good specific.RT quantitative PCR relative to the traditional PCR for the detection of transgene. With the advantages of rapid, high throughput, high selectivity and high sensitivity, it has great potential in the field of detection of genetically modified foods. The detection of glyphosate resistant transgenic soybean components in common soybean products on the market: 28 kinds of samples from the bulk soybean products and the bags from the supermarkets from the farmers' market and the RTPCR reaction The results showed that 2 kinds of glyphosate resistant transgenic soybean CaMv35s promoter, Nos terminator and EPSPS gene were detected in 11 bags of soybean stem, and only 1 detected C in 1 kinds of glyphosate transgenic soybean CaMv35s promoter and Nos terminal.17 bulk soybean products. In the aMv35s promoter, the Nos terminator and the EPSPS gene.28 samples, there was no detection of glyphosate resistant genetically modified soybean ingredients in the label which was clearly labeled as non GM soybean, and 4 kinds of transgenic soybean components containing glyphosate were detected.
【學(xué)位授予單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：TS214

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本文編號：2092050