本文選題：麻花艽 + β-amyrin合成酶基因　； 參考：《西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》2017年11期

【摘要】：【目的】本文擬進(jìn)行麻花艽β-amyrin合成酶基因GsAS2的載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化。【方法】首先利用gateway方法進(jìn)行GsAS2的RNAi載體(pK7GWIWG-GsAS2)和過表達(dá)載體(pK7WG2D-GsAS2)的構(gòu)建,并利用基因槍轉(zhuǎn)化麻花艽胚性愈傷組織,經(jīng)卡那霉素(Kan)篩選后,進(jìn)一步用35S啟動(dòng)子引物進(jìn)行抗性植株總DNA的PCR檢測(cè)。【結(jié)果】獲得GsAS2的RNAi陽性植株5株,過表達(dá)植株8株,轉(zhuǎn)化頻率分別為2.94%和4.00%。對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行GsAS2的半定量RT-PCR分析和齊墩果酸的HPLC測(cè)定表明:GsAS2的表達(dá)在RNAi系中受到較大抑制,其齊墩果酸含量均低于對(duì)照(為對(duì)照的48.5%~80.7%),而在過表達(dá)系中GsAS2則超量表達(dá),且齊墩果酸含量均高于對(duì)照(為對(duì)照的1.67~2.46倍)�！窘Y(jié)論】說明GsAS2的表達(dá)與下游產(chǎn)物齊墩果酸的含量關(guān)系密切。
[Abstract]:[objective] to construct the vector of GsAS2 of Gentiana macrophylla 尾 -amyrin synthase gene and its genetic transformation. [methods] the RNAi vector (pK7GWIWG-GsAS2) and the overexpression vector (pK7WG2D-GsAS2) of GsAS2 were constructed by gateway. The embryogenic callus of Gentiana macrophylla was transformed by gene gun. After being screened by kanamycin (Kan), the total DNA of resistant plants was detected by using 35s promoter primer. [results] 5 RNAi positive plants and 8 overexpression plants were obtained. The transformation frequency was 2.94% and 4.00% respectively. The semi-quantitative RT-PCR analysis of GsAS2 and the HPLC assay of oleanolic acid in transgenic plants showed that the expression of Oleanolic acid was significantly inhibited in RNAi lines, and the content of oleanolic acid in transgenic plants was lower than that in the control (48.5% of the control), while the overexpression of GsAS2 in the over-expressed lines was higher than that in the control. The content of oleanolic acid was higher than that of the control (1.67 ~ 2.46 times of the control). [conclusion] the expression of GsAS2 was closely related to the content of the downstream product oleanolic acid.
【作者單位】： 萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院信息工程系;山東大學(xué)生命科學(xué)院植物細(xì)胞工程與種質(zhì)創(chuàng)新教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：萊蕪職業(yè)技術(shù)學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金(2015bsky01)
【分類號(hào)】：Q943.2;S567.239

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本文編號(hào)：2084438