本文選題：黑曲霉 + 原生質(zhì)體��； 參考：《食品工業(yè)科技》2016年18期

【摘要】：以一株產(chǎn)檸檬酸的黑曲霉菌株為研究材料,為了優(yōu)化菌株的深層發(fā)酵形態(tài),提高檸檬酸產(chǎn)量,采用RNA干擾的方法,使與形態(tài)建成相關(guān)的幾丁質(zhì)合成酶chs基因沉默。首先將酶切得到的chs基因片段與質(zhì)粒p JL43-RNAi連接,構(gòu)建成干擾載體。為提高干擾載體的轉(zhuǎn)化率,對原生質(zhì)體制備、再生和轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了優(yōu)化。然后通過聚乙二醇(PEG)介導(dǎo),將構(gòu)建的干擾載體導(dǎo)入黑曲霉的原生質(zhì)體中,經(jīng)過轉(zhuǎn)化,篩選出形態(tài)突變株,并進(jìn)行深層發(fā)酵。結(jié)果表明,在36.5℃培養(yǎng)16 h的幼嫩菌絲最利于原生質(zhì)體釋放;而5 mg/m L的溶菌酶,10 mg/m L的蝸牛酶和10 mg/m L的纖維素酶組成的混合酶系為最優(yōu)的酶組合;在30℃下,以100 r/min酶解3 h可使原生質(zhì)體的最大產(chǎn)量達(dá)到5.11×106/m L。最優(yōu)的再生培養(yǎng)基為完全培養(yǎng)基,可以使再生率達(dá)到35.33%。獲得的3株轉(zhuǎn)化株的chs基因表達(dá)量降低,同時(shí)在深層發(fā)酵過程中,菌球的分支頻率降低,分支縮短,離散菌絲減少,檸檬酸產(chǎn)量也分別提高12.33%,24.17%和19.61%。通過分子改造的形態(tài)突變株具有良好的產(chǎn)酸性能,對推動檸檬酸發(fā)酵工業(yè)的進(jìn)步有重要意義。
[Abstract]:In order to optimize the deep fermentation morphology of the strain and to improve the yield of citric acid , the gene silencing of chitin synthetase related to morphology was optimized .
【作者單位】： 安徽大學(xué)物理與材料科學(xué)學(xué)院;中國科學(xué)院離子束生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;安徽省國營沙河集林業(yè)總場白米山林場;
【分類號】：TS201.3

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前8條

1 蓋志強(qiáng);幾丁質(zhì)合成酶抑制劑香豆素類新化合物的設(shè)計(jì)合成與生物活性研究[D];西南大學(xué);2015年

2 蔣金河;鐮刀菌幾丁質(zhì)合成酶Chs1和Chs2基因小片段RNA干擾功能分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 張小平;禾谷鐮刀菌幾丁質(zhì)合成酶的功能研究[D];浙江大學(xué);2016年

4 占智高;家蠶表皮型幾丁質(zhì)合成酶基因的克隆及表達(dá)分析[D];西南大學(xué);2010年

5 孔令斐;家蠶幾丁質(zhì)酶與幾丁質(zhì)合成酶的基因表達(dá)與功能研究[D];蘇州大學(xué);2010年

6 卓微偉;家蠶Chs和Cph-like基因的表達(dá)特征及其調(diào)控作用[D];蘇州大學(xué);2013年

7 王穎;褐飛虱和灰飛虱幾丁質(zhì)合成酶及其兩個(gè)可變外顯子的研究[D];浙江大學(xué);2012年

8 鄧喬;幾丁質(zhì)合成酶抑制劑喹啉-2(1H)酮類新化合物的設(shè)計(jì)合成與生物活性研究[D];西南大學(xué);2014年

，

本文編號：2080626