本文選題：c-Myc基因 + 基因克隆��； 參考：《中國生物工程雜志》2017年02期

【摘要】：目的:克隆小鼠c-Myc基因,構(gòu)建原核表達載體并對其進行蛋白表達及純化。方法:以TetO-FUW-OSKM質(zhì)粒為模板經(jīng)PCR擴增c-Myc基因,再通過基因重組技術(shù)與pET-3C載體相連轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α。經(jīng)抗性篩選,PCR鑒定陽性重組子,測序正確后,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3),IPTG誘導蛋白表達,SDS-PAGE對重組蛋白進行鑒定分析。結(jié)果:DNA電泳結(jié)果證實PCR擴增產(chǎn)物與預期大小一致,DNA測序結(jié)果顯示與GenBank公布的c-Myc基因序列一致,IPTG誘導SDS-PAGE電泳后,在分子量64kDa左右出現(xiàn)誘導后蛋白新增條帶,與預測的c-Myc分子量大小一致。結(jié)論:成功地構(gòu)建了pET3C-Myc原核表達載體,表達并純化出了c-Myc蛋白,為今后研究c-Myc蛋白及相關(guān)蛋白誘導體細胞成多能干細胞打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to clone mouse c-Myc gene, construct prokaryotic expression vector, express and purify c-Myc gene. Methods: the c-Myc gene was amplified by PCR using TetO-FUW-OSKM plasmid as template, and then transformed into E. coli DH5 偽 by gene recombination with pET-3C vector. The recombinant plasmid was transformed into E. coli Rosetta (DE3) / IPTG induced protein expression by SDS-PAGE. The recombinant protein was identified by SDS-PAGE. Results the results of DNA electrophoresis confirmed that the PCR amplification products were consistent with the expected size. The results of DNA sequencing showed that after SDS-PAGE was induced by IPTG, a new protein band appeared in the molecular weight of about 64kDa, which was consistent with the sequence of c-Myc gene published by GenBank. The molecular weight of c-Myc is consistent with the predicted molecular weight. Conclusion: the prokaryotic expression vector pET3C-Myc was successfully constructed, c-Myc protein was expressed and purified, which laid a foundation for the further study of c-Myc protein and related protein inducing pluripotent stem cells.
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學;溫州醫(yī)科大學藥學院;
【基金】：廣東省自然科學基金(2015A030313527) 廣東省省級科技計劃項目(2013B031800014) 東莞市社會科技發(fā)展項目(2013108101062) 浙江省自然科學基金(LY13H080004)資助項目
【分類號】：Q78

【參考文獻】

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1 馬海濱;侯玲玲;王曉宇;關(guān)偉軍;馬月輝;;誘導性多潛能干細胞(iPS細胞)的研究進展[J];中國生物工程雜志;2011年08期

2 楊陽;劉斌;龐卯;戎利民;;蛋白誘導誘導多能干細胞技術(shù)的研究進展[J];中華生物醫(yī)學工程雜志;2013年03期

【共引文獻】

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1 項麗;王申;田海山;鐘美娟;周汝濱;曹定國;梁朋;張國平;何滔;龐實鋒;;小鼠c-Myc基因的克隆表達及其純化[J];中國生物工程雜志;2017年02期

2 楊中楷;梁永霞;劉盛博;;山中伸彌的“論文—專利”二元行為模式分析[J];中國科學院院刊;2016年09期

3 潘聰;楊柳;孫建平;;誘導多潛能干細胞在臨床治療中的研究進展及前景分析[J];中國醫(yī)藥指南;2012年22期

【相似文獻】

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1 ;迄今最簡單有效的基因合成技術(shù)[J];生物醫(yī)學工程與臨床;2010年06期

2 王文凱;藍東明;王永華;楊博;;一種改進的基因合成方法[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2011年18期

3 馮淼;王璐;田敬東;;基因合成技術(shù)研究進展[J];生物工程學報;2013年08期

4 長晟;;細菌酶制造基因[J];國外醫(yī)學情報;1983年09期

5 羅貴民;;來自細菌的酶能夠為人類制造基因[J];生命的化學(中國生物化學會通訊);1983年02期

6 柴勇;;可用于基因合成的新型酶[J];生物技術(shù)通報;1986年06期

7 石紹業(yè),潘時,劉虹,范慧奇,周靜;人類3個多肽基因的人工合成和對人工基因合成意義的探討[J];東北林業(yè)大學學報;1991年04期

8 陳常慶,戚志紅;基因合成[J];遺傳工程;1983年03期

9 干科達;陳常慶;;一種快速簡便的多肽基因合成方法[J];生物工程學報;1991年02期

10 睿中;基因機:發(fā)展迅速,市場有限[J];遺傳工程;1984年04期

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1 李玉;嚴紅;馬立新;;一種快速、簡便、經(jīng)濟的基因合成方法[A];2006年度學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

2 林建銀;徐劍文;林旭;齊元麟;張曉艷;;蛇毒金屬蛋白酶抑制劑的基因合成與蛋白表達[A];華東六省一市生物化學與分子生物學學會2006年學術(shù)交流會論文集[C];2006年

3 程雙懷;;圖片在基因工程教學中的應(yīng)用[A];高等院校遺傳學教學改革探索[C];2010年

4 趙向陽;金璐;楊昭;孫月;王海波;孟令軍;王彥峰;;重組人白介素-18的基因合成、克隆表達[A];吉林省第六屆生命科學大型學術(shù)報告會論文集[C];2008年

5 呂慧能;;基因和基因組操作技術(shù):現(xiàn)狀和未來發(fā)展的思考[A];高等院校遺傳學教學改革探索[C];2010年

6 康立新;嚴紅;張桂敏;馬向東;馬立新;;T7核酸內(nèi)切酶Ⅰ的基因合成、克隆與表達[A];2006年度學術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

7 朱敏;焦玉蓮;王來成;張捷;崔彬;曲蕓蕓;劉曉雯;徐潔;孫新平;高學軍;趙躍然;;人高遷移率族蛋白B1 Abox的基因合成及其在大腸桿菌中的表達[A];山東生物化學與分子生物學會2009年學術(shù)會議論文匯編[C];2009年

8 崔球;童宇峰;馮銀剛;王金鳳;;古菌DNA結(jié)合蛋白Ssh10b的基因合成,表達及其初步核磁共振研究[A];第九次全國生物物理大會學術(shù)會議論文摘要集[C];2002年

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1 本報記者 沈洪;標準：基因檢測的“基因”[N];中國質(zhì)量報;2014年

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3 記者 劉霞;美“人造生命”小組發(fā)明簡單有效基因合成技術(shù)[N];科技日報;2010年

4 記者 黃X;美發(fā)明最簡基因合成法[N];新華每日電訊;2010年

5 記者何德功;慢性骨髓性白血病相關(guān)基因被發(fā)現(xiàn)[N];人民日報;2003年

6 記者 陳衛(wèi)東;我破解基因工程產(chǎn)業(yè)化難題[N];科技日報;2007年

7 記者 劉鋒 通訊員 桑曉東;蘇州率先完成H7N9病毒關(guān)鍵基因合成[N];科技日報;2013年

8 何積惠 編譯;“孤兒”基因之謎[N];文匯報;2014年

9 江蘇省科學技術(shù)發(fā)展戰(zhàn)略研究院區(qū)域創(chuàng)新研究中心 劉中正;合成生物學開啟新時代[N];江蘇科技報;2014年

10 何德功;可防止衰老和延長生命的蛋白質(zhì)被發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

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1 高朝輝;基因合成方法的改進與驗證[D];吉林大學;2008年

2 任力強;小鼠白細胞介素4基因的化學合成、克隆和表達[D];第四軍醫(yī)大學;1990年

3 張友鴻;人FL基因在大腸桿菌中的表達研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2002年

4 徐娟;腸道病毒EV71 VP1基因的優(yōu)化和免疫原性的研究[D];南京醫(yī)科大學;2011年

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1 邱瑾;兩種木聚糖酶在畢赤酵母中的高效表達及最適pH的關(guān)鍵點研究[D];上海海洋大學;2016年

2 杜燦燦;玉米紫色葉鞘基因的定位及其候選基因預測[D];揚州大學;2016年

3 謝磊;神經(jīng)肽AST_（13）基因串聯(lián)體的構(gòu)建與表達[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學;2004年

4 焦亮;變形桿菌脂肪酶基因合成和畢赤酵母表達[D];湖北大學;2012年

5 謝曙英;血吸蟲蟲卵蛋白IPSE基因合成、表達及功能分析[D];南昌大學;2008年

6 余霖霖;α-半乳糖苷酶基因及酸性磷酸酶基因的克隆與表達研究[D];蘇州大學;2007年

7 阮孟斌;人三葉因子3基因的合成及轉(zhuǎn)化番茄的研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學;2005年

8 付瑤;人粒細胞集落刺激因子的基因合成、原核表達與活性研究[D];吉林大學;2011年

9 傅詠;ω-3脂肪酸去飽和酶基因△17真核表達載體的構(gòu)建表達與功能研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2012年

10 謝巍;鴨白細胞介素2（IL-2）基因的克隆和表達[D];重慶醫(yī)科大學;2006年

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本文編號：2059250