本文選題：病毒 + AURKA基因��； 參考：《蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》2016年11期

【摘要】：目的:針對(duì)AURKA基因構(gòu)建RNA干擾重組慢病毒質(zhì)粒并進(jìn)行慢病毒包裝,初步探討AURKA基因的功能。方法:應(yīng)用p GCLV-GFP慢病毒載體構(gòu)建針對(duì)AURKA的shRNA載體,轉(zhuǎn)染包裝293T細(xì)胞,收集病毒上清液,轉(zhuǎn)染肺腺癌細(xì)胞株A549。熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達(dá)情況確定轉(zhuǎn)染效率,應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)AURKA基因在蛋白水平表達(dá)的變化,以明確RNAi的抑制率。應(yīng)用Brd U法分析干擾AURKA前后A549細(xì)胞增殖情況的變化,運(yùn)用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)干擾AURKA后A549細(xì)胞株對(duì)長(zhǎng)春新堿敏感性的變化。結(jié)果:針對(duì)AURKA基因的RNAi慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建成功,PCR和DNA測(cè)序鑒定實(shí)驗(yàn)表明插入位點(diǎn)與干擾片斷的堿基序列完全正確。在293T細(xì)胞中進(jìn)行慢病毒包裝,獲得高滴度病毒上清液。通過重組慢病毒載體將AURKA shRNA轉(zhuǎn)導(dǎo)入A549細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染效率為100%。Western blot檢測(cè)證實(shí)LV-AURKA慢病毒顯著抑制AURKA的表達(dá),Brd U檢測(cè)顯示AURKA基因表達(dá)下調(diào)抑制了A549細(xì)胞的增殖。克隆形成實(shí)驗(yàn)表明AURKA基因表達(dá)增強(qiáng)A549細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿的敏感性。結(jié)論:慢病毒載體介導(dǎo)的靶向AURKA的RNA干擾可有效抑制AURKA表達(dá),降低肺腺癌A549細(xì)胞的增殖能力,并且增強(qiáng)A549細(xì)胞對(duì)長(zhǎng)春新堿的敏感性。
[Abstract]:Aim: to construct recombinant lentivirus plasmid with RNA interference targeting AURKA gene and to investigate the function of AURKA gene. Methods: pGCLV-GFP lentivirus vector was used to construct shRNA vector for AURKA. The recombinant plasmid was transfected into 293T cells. The supernatant was collected and transfected into lung adenocarcinoma cell line A549. The transfection efficiency was determined by observing the expression of green fluorescent protein under fluorescence microscope, and the changes of Aurka gene expression at protein level were detected by Western blot to determine the inhibition rate of RNAi. Brd-U assay was used to analyze the proliferation of A549 cells before and after AURKA interference, and the sensitivity of A549 cells to vincristine was detected by clone formation assay. Results: the RNAi lentivirus expression vector of Aurka gene was successfully constructed and identified by PCR and DNA sequencing. The supernatant of high titer virus was obtained by packaging lentivirus in 293T cells. AURKA shRNA was transfected into A549 cells by recombinant lentivirus vector. The transfection efficiency was 100%. Western blot assay confirmed that LV-AURKA lentivirus significantly inhibited the expression of AURKA. Brd U assay showed that AURKA gene expression down-regulated the proliferation of A549 cells. Cloning assay showed that AURKA gene expression enhanced the sensitivity of A549 cells to vincristine. Conclusion: lentivirus vector mediated RNA interference targeting AURKA can effectively inhibit the expression of AURKA, reduce the proliferation of lung adenocarcinoma A549 cells, and enhance the sensitivity of A549 cells to vincristine.
【作者單位】： 南通大學(xué)附屬吳江醫(yī)院胸外科;江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院胸外科;南通大學(xué)第四附屬醫(yī)院胸外科;蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部;
【基金】：蘇州市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目(SYS201301) 昆山市科學(xué)基金項(xiàng)目(ks1234)
【分類號(hào)】：R734.2;Q78

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本文編號(hào)：2052709