本文選題：病毒 + AURKA基因��； 參考：《蚌埠醫(yī)學院學報》2016年11期

【摘要】：目的:針對AURKA基因構(gòu)建RNA干擾重組慢病毒質(zhì)粒并進行慢病毒包裝,初步探討AURKA基因的功能。方法:應(yīng)用p GCLV-GFP慢病毒載體構(gòu)建針對AURKA的shRNA載體,轉(zhuǎn)染包裝293T細胞,收集病毒上清液,轉(zhuǎn)染肺腺癌細胞株A549。熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達情況確定轉(zhuǎn)染效率,應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測AURKA基因在蛋白水平表達的變化,以明確RNAi的抑制率。應(yīng)用Brd U法分析干擾AURKA前后A549細胞增殖情況的變化,運用克隆形成實驗檢測干擾AURKA后A549細胞株對長春新堿敏感性的變化。結(jié)果:針對AURKA基因的RNAi慢病毒表達載體構(gòu)建成功,PCR和DNA測序鑒定實驗表明插入位點與干擾片斷的堿基序列完全正確。在293T細胞中進行慢病毒包裝,獲得高滴度病毒上清液。通過重組慢病毒載體將AURKA shRNA轉(zhuǎn)導入A549細胞中,轉(zhuǎn)染效率為100%。Western blot檢測證實LV-AURKA慢病毒顯著抑制AURKA的表達,Brd U檢測顯示AURKA基因表達下調(diào)抑制了A549細胞的增殖�？寺⌒纬蓪嶒灡砻鰽URKA基因表達增強A549細胞對長春新堿的敏感性。結(jié)論:慢病毒載體介導的靶向AURKA的RNA干擾可有效抑制AURKA表達,降低肺腺癌A549細胞的增殖能力,并且增強A549細胞對長春新堿的敏感性。
[Abstract]:Aim: to construct recombinant lentivirus plasmid with RNA interference targeting AURKA gene and to investigate the function of AURKA gene. Methods: pGCLV-GFP lentivirus vector was used to construct shRNA vector for AURKA. The recombinant plasmid was transfected into 293T cells. The supernatant was collected and transfected into lung adenocarcinoma cell line A549. The transfection efficiency was determined by observing the expression of green fluorescent protein under fluorescence microscope, and the changes of Aurka gene expression at protein level were detected by Western blot to determine the inhibition rate of RNAi. Brd-U assay was used to analyze the proliferation of A549 cells before and after AURKA interference, and the sensitivity of A549 cells to vincristine was detected by clone formation assay. Results: the RNAi lentivirus expression vector of Aurka gene was successfully constructed and identified by PCR and DNA sequencing. The supernatant of high titer virus was obtained by packaging lentivirus in 293T cells. AURKA shRNA was transfected into A549 cells by recombinant lentivirus vector. The transfection efficiency was 100%. Western blot assay confirmed that LV-AURKA lentivirus significantly inhibited the expression of AURKA. Brd U assay showed that AURKA gene expression down-regulated the proliferation of A549 cells. Cloning assay showed that AURKA gene expression enhanced the sensitivity of A549 cells to vincristine. Conclusion: lentivirus vector mediated RNA interference targeting AURKA can effectively inhibit the expression of AURKA, reduce the proliferation of lung adenocarcinoma A549 cells, and enhance the sensitivity of A549 cells to vincristine.
【作者單位】： 南通大學附屬吳江醫(yī)院胸外科;江蘇大學附屬昆山醫(yī)院胸外科;南通大學第四附屬醫(yī)院胸外科;蘇州大學醫(yī)學部;
【基金】：蘇州市科學技術(shù)計劃項目(SYS201301) 昆山市科學基金項目(ks1234)
【分類號】：R734.2;Q78

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本文編號：2052709