本文選題：PRDM基因 + 雙熒光素酶報告基因�。� 參考：《重慶醫(yī)學》2017年11期

【摘要】：目的以PRDM1基因啟動子為靶點構建雙熒光素酶報告基因載體,建立體外藥物篩選細胞模型,并對中草藥小分子化合物進行篩選。方法將人PRDM1基因啟動子序列(267、1 257bp)克隆入熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic中,構建重組質(zhì)粒pGL3-PRDM1并與內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK瞬時共轉(zhuǎn)染工具細胞,通過檢測熒光素酶報告基因表達水平的變化反映PRDM1基因啟動子的啟動轉(zhuǎn)錄活性,并對共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒比例、工具細胞選擇等條件進行探索和優(yōu)化,相關藥物處理進行驗證。結果成功構建了熒光素酶報告載體pGL3-PRDM1。用0.5、1、2、4μmol/L的5-Aza-CdR處理重組的U266細胞篩選模型,與0μmol/L 5-Aza-CdR相比,增加5-Aza-CdR的刺激,熒光強度及PRDM1基因啟動子的活性呈劑量依賴性增強。與0μmol/L相比,青蒿琥酯從5μmol/L濃度開始對PRDM1基因啟動子活性呈明顯降低(P0.05),在20μmol/L濃度時降到最低;白芍總苷呈現(xiàn)小劑量促進PRDM1啟動子活性,高劑量抑制PRDM1基因啟動子活性。青蒿琥酯對細胞生長增殖影響較小,白芍總苷對細胞生長增殖的影響較復雜。結論成功建立了以PRDM1基因啟動子為靶點的藥物篩選模型,并篩選出青蒿琥酯能抑制PRDM1基因啟動子活性。
[Abstract]:Objective to construct a double luciferase reporter gene vector with PRDM1 gene promoter as the target, to establish a drug screening cell model in vitro and to screen small molecular compounds of Chinese herbal medicine. Methods the promoter sequence of human PRDM1 gene was cloned into luciferase reporter gene vector pGL3-basic. The recombinant plasmid pGL3-PRDM1 was cotransfected with pRL-TK. The change of luciferase reporter gene expression level reflected the priming transcriptional activity of PRDM1 gene promoter, and the conditions of co-transfection plasmid ratio and tool cell selection were explored and optimized, and the related drug treatment was verified. Results the luciferase report vector pGL3-PRDM1 was successfully constructed. Compared with 0 渭 mol / L 5-Aza-CdR, 5-Aza-CdR increased 5-Aza-CdR stimulation, fluorescence intensity and PRDM1 promoter activity in a dose-dependent manner. Compared with 0 渭 mol / L, artesunate decreased the activity of PRDM1 gene promoter from 5 渭 mol / L to the lowest at 20 渭 mol / L. Total glucoside of Paeoniae Paeoniae Paeoniae Alba increased PRDM1 promoter activity at low dose and inhibited PRDM1 promoter activity at high dose. Artesunate had little effect on cell growth and proliferation, while total glucosides of paeony had more complex effects on cell growth and proliferation. Conclusion A drug screening model targeting PRDM1 gene promoter was successfully established and artesunate could inhibit the activity of PRDM1 gene promoter.
【作者單位】： 鄭州大學第一附屬醫(yī)院檢驗科;河南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科;
【基金】：河南省衛(wèi)生廳計劃指導項目(201304015) 河南省教育廳科技研究重點項目(14A320026) 鄭州市科技局資助項目(141PPTGG437)
【分類號】：R96

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本文編號：2049335