本文選題：Nanos2基因 + 水牛精原干細(xì)胞　； 參考：《廣西大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：水牛精原干細(xì)胞(SSCs)是一種既能夠進(jìn)行自我更新,又可以進(jìn)行減數(shù)分裂產(chǎn)生攜帶有遺傳物質(zhì)的單倍體配子的細(xì)胞,在水牛生殖生理過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。研究水牛精原干細(xì)胞將有望解決水牛繁殖力低下的問(wèn)題,也更有利于我們對(duì)水牛精子發(fā)生過(guò)程進(jìn)行深入研究,并能夠利用精原干細(xì)胞生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等。研究精原干細(xì)胞的過(guò)程中,尋找到一種可作為水牛精原干細(xì)胞特異性標(biāo)記的基因是我們得以開展后續(xù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。Nanos2隸屬于于Nanos基因家族,是一種重要的RNA綁定蛋白基因,在小鼠上能夠調(diào)節(jié)和控制雄性生殖系干細(xì)胞的發(fā)育和自我更新,在水牛上對(duì)該基因尚無(wú)相關(guān)研究。本課題期望通過(guò)對(duì)研究Nanos2基因在水牛精原干細(xì)胞中的表達(dá),確定一種水牛精原干細(xì)胞的特異性標(biāo)記基因,并以此基因?yàn)榛A(chǔ),進(jìn)行相關(guān)調(diào)節(jié)及信號(hào)通路的深入研究。第一章:使用cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)獲得水牛Nanos2序列全長(zhǎng),隨后通過(guò)生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)水牛Nanos2與其他常見哺乳動(dòng)物物種之間呈現(xiàn)較高的保守性。第二章:利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)水牛Nanos2的mRNA表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)雖然Nanos2在水牛的多個(gè)組織中表達(dá),但在睪丸組織中發(fā)現(xiàn)其mRNA表達(dá)水平最高,并且隨著年齡增長(zhǎng),Nanos2的mRNA表達(dá)水平在胎兒和青春期的水牛睪丸組織中較高,在成年睪丸中顯著降低。經(jīng)過(guò)細(xì)胞分選,并對(duì)分選出的精原干細(xì)胞進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè),發(fā)現(xiàn)在精原干細(xì)胞中的Nanos2的mRNA表達(dá)水平顯著高于睪丸中其他類型的細(xì)胞。通過(guò)免疫組織化學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)在青春期睪丸中NANOS2表達(dá)的模式類似于精原干細(xì)胞標(biāo)記PGP9.5的模式;相反,NANOS2的表達(dá)在成年睪丸中較低,并限于細(xì)長(zhǎng)型精子細(xì)胞。通過(guò)WestemBlot實(shí)驗(yàn),檢測(cè)到NANOS2蛋白大小約為37kDa。第三章:探索利用免疫缺陷型裸鼠為實(shí)驗(yàn)載體進(jìn)行水牛睪丸體外結(jié)構(gòu)重組,構(gòu)建體外驗(yàn)證精原干細(xì)胞功能性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?初步論證了異種睪丸組織細(xì)胞在裸鼠背部皮下的組織重構(gòu)可行性,為后續(xù)研究精原干細(xì)胞中Nanos2的相關(guān)調(diào)控機(jī)制對(duì)水牛雄性生殖生理過(guò)程的影響提供了實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。以上研究首次證明了Nanos 是水牛早期精原干細(xì)胞的分子標(biāo)記,并可能與其在小鼠中的表達(dá)模式類似,是水牛精原干細(xì)胞發(fā)育和自我更新過(guò)程中起著關(guān)鍵作用的調(diào)控基因。
[Abstract]:Buffalo spermatogonial stem cell (SSCs) is a kind of cells that can not only self-renew but also meiosis to produce haploid gametes carrying genetic material, which plays an important role in the reproductive physiology of buffalo. The study of buffalo spermatogonial stem cells will be expected to solve the problem of buffalo reproduction, and will be more conducive to our in-depth study of buffalo spermatogenesis and the ability to use spermatogonial stem cells to produce transgenic animals and so on. In the course of studying spermatogonial stem cells, finding a gene that can be used as a specific marker of buffalo spermatogonial stem cells is the basis of our subsequent experiments. Nanos2 belongs to the Nanos gene family and is an important RNA-binding protein gene. It can regulate and control the development and self-renewal of male reproductive stem cells in mice, but there is no related research on the gene in buffalo. The purpose of this study is to study the expression of Nanos2 gene in buffalo spermatogonial stem cells and to identify a specific marker gene for buffalo spermatogonial stem cells. Chapter 1: the full length of the buffalo Nanos2 sequence was obtained by rapid amplification of cDNA terminal rDNA. The results of bioinformatics analysis showed that buffalo Nanos2 was highly conserved with other common mammalian species. Chapter 2: the mRNA expression level of Nanos2 in buffalo was detected by qRT-PCR. Although Nanos2 was expressed in many tissues of buffalo, it was found that Nanos2 mRNA expression was the highest in testis. The mRNA expression of Nanos2 was higher in fetal and pubertal buffalo testis and decreased significantly in adult testis with age. The mRNA expression of Nanos2 in spermatogonial stem cells was significantly higher than that of other types of cells in testis. The expression pattern of NANOS2 was similar to that of spermatogonial stem cell labeled PGP 9.5 in pubertal testis by immunohistochemical analysis, but the expression of NANOS2 in adult testis was lower than that in spermatogonial stem cells and was limited to slender spermatozoa. The size of NANOS2 protein was about 37 kDa. Chapter 3: to explore the in vitro structure recombination of buffalo testis with the immunodeficient nude mice as the experimental carrier, and to construct a functional experimental model of spermatogonial stem cells in vitro to verify the function of spermatogonial stem cells. The feasibility of subcutaneous tissue remodeling of xenogeneic testicular cells in nude mice was preliminarily demonstrated, which provided an experimental platform for further study on the effects of Nanos2 in spermatogonial stem cells on the male reproductive physiological process of buffalo. These results suggest that Nanos is a molecular marker of early spermatogonial stem cells in buffalo and may be similar to its expression pattern in mice. Nanos may play a key role in the development and self-renewal of buffalo spermatogonial stem cells.
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S823.83

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本文編號(hào)：2043810