本文選題：精液冷凍 + DNA甲基化�。� 參考：《山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)》2017年01期

【摘要】：目的探討精液冷凍復(fù)蘇過程對人精子印記基因SNRPN、GRB10甲基化狀態(tài)和mRNA表達的影響。方法將20份人精液標本平行分為2組:新鮮組(n=20)和冷凍組(n=20)。采用計算機輔助精子分析(CASA)進行兩組精液的常規(guī)參數(shù)檢測;Percoll密度梯度離心法純化精子,SNRPN、GRB10基因的甲基化率采用Sequenom DNA測序分析;SNRPN、GRB10基因的mRNA表達采用qRT-PCR定量分析。結(jié)果冷凍組精子濃度、精子活力、前向運動精子百分比均低于新鮮組(P0.05),冷凍組不活動精子百分比顯著高于新鮮組(P0.05);冷凍組精子SNRPN mRNA表達顯著低于新鮮組(P0.05);冷凍組精子GRB10啟動子區(qū)亞片段檢測的-902Cp G位點(即轉(zhuǎn)錄起始點上游989 bp處)的甲基化率顯著下降(P0.05);GRB10 mRNA表達較新鮮組顯著升高(P0.05)。結(jié)論冷凍復(fù)蘇過程影響人精子GRB10、SNRPN基因的DNA甲基化和mRNA表達,提示精子庫常規(guī)使用的精液凍儲技術(shù)可能改變配子的表觀遺傳信息,進而調(diào)控基因的表達。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of cryopreservation on the methylation and mRNA expression of human sperm imprinting gene SNRPNN GRB10. Methods Twenty human semen specimens were divided into two groups: fresh group and frozen group. The methylation rate of spermatozoa SNRPNN GRB10 gene purified by Percoll density gradient centrifugation was analyzed by Sequenom DNA sequencing and quantitative analysis of mRNA expression of SNRPNU GRB10 gene by qRT-PCR. Results sperm concentration and sperm motility in cryopreservation group. The percentage of forward motile sperm was lower than that of fresh group, the percentage of inactive sperm in frozen group was significantly higher than that in fresh group, the expression of SNRPN mRNA in frozen group was significantly lower than that in fresh group, and the subfragment of GRB10 promoter region in frozen group was -902CpG. The methylation rate of the locus (989 BP upstream of the transcriptional start point) was significantly decreased. The expression of P0.05 GRB10 mRNA was significantly higher than that of the fresh group. Conclusion cryopreservation affects DNA methylation and mRNA expression of SNRPN gene in human spermatozoa, suggesting that cryopreservation technique used in sperm bank may change the epigenetic information of gametes and then regulate gene expression.
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)生育力保持教育部重點實驗室寧夏生殖與遺傳重點實驗室;寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院寧夏人類精子庫;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81460243,81560249) 寧夏回族自治區(qū)科技攻關(guān)項目(2012ZYS239) 寧夏醫(yī)科大學(xué)生殖與遺傳基礎(chǔ)及臨床創(chuàng)新團隊人才項目(FGCT201505)
【分類號】：R321

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本文編號：2033852