農(nóng)桿菌介導(dǎo)多裂葉荊芥轉(zhuǎn)化體系建立及Cjhppd基因?qū)?/H1>
發(fā)布時(shí)間：2018-06-17 11:56
本文選題：多裂葉荊芥(Nepeta + multifida) ； 參考：《河北大學(xué)》2017年碩士論文
【摘要】：對(duì)羥基苯基丙酮酸雙加氧酶(ρ-hydroxyphenylpyruvate dioxigenase,HPPD,EC1.13.11.27)是20世紀(jì)90年代確定的除草劑靶標(biāo)酶,在植物體內(nèi)它可參與生育酚和質(zhì)體醌的生物合成。Cjhppd是從對(duì)除草劑DTP具有抗性的黃連(Coptics japonica)小檗堿高產(chǎn)細(xì)胞系中克隆出來(lái)的編碼黃連HPPD的基因,本試驗(yàn)旨在將Cjhppd基因?qū)攵嗔讶~荊芥并獲得轉(zhuǎn)基因植株,以研究Cjhppd對(duì)轉(zhuǎn)基因植物抗性性狀改良的作用。為建立根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的多裂葉荊芥轉(zhuǎn)化體系,以攜帶pBI121-gfp質(zhì)粒的根癌農(nóng)桿菌LBA4404菌株介導(dǎo),荊芥試管苗帶葉腋莖段為轉(zhuǎn)化受體材料,探究了預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、菌液濃度、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間4個(gè)因素對(duì)荊芥轉(zhuǎn)化效果的影響。每個(gè)因素設(shè)置4個(gè)水平,以L16(45)正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行,每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。篩選的卡那霉素抗性芽以及植株進(jìn)行g(shù)fp熒光檢測(cè)和PCR、RT-PCR分子檢測(cè)。按照上述優(yōu)化的轉(zhuǎn)化條件,以攜帶pGWB2-Cjhppd植物表達(dá)載體的根癌農(nóng)桿菌LBA4404菌株介導(dǎo)多裂葉荊芥的Cjhppd基因轉(zhuǎn)化,得到轉(zhuǎn)Cjhppd多裂葉荊芥植株。對(duì)轉(zhuǎn)Cjhppd荊芥植株進(jìn)行PCR、RT-PCR分子檢測(cè);用含有不同濃度的DTP和NaCl的Hoagland營(yíng)養(yǎng)液或MS培養(yǎng)基對(duì)多裂葉荊芥轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行脅迫處理,分析轉(zhuǎn)基因植株的除草劑抗性和耐鹽性。主要結(jié)果如下:1.gfp基因?qū)朕D(zhuǎn)化多裂葉荊芥,并在根莖葉花中表達(dá);轉(zhuǎn)化植株的根中g(shù)fp基因表達(dá)量最多;其次是莖和葉中,且兩者表達(dá)量差別不大;花中最少;預(yù)培養(yǎng)5 d、菌液濃度為0.7、侵染15 min、共培養(yǎng)3 d為多裂葉荊芥的最優(yōu)轉(zhuǎn)化條件。轉(zhuǎn)化率為20%,每個(gè)外植體再生抗性不定芽數(shù)平均為5個(gè);抗性芽生根培養(yǎng)30 d后得到轉(zhuǎn)化植株,生根率為60%。荊芥轉(zhuǎn)化體系的建立為利用植物基因工程改良其遺傳性狀奠定基礎(chǔ)。2.篩選培養(yǎng)30 d后,將轉(zhuǎn)Cjhppd卡那霉素抗性芽生根培養(yǎng)1個(gè)月后,得到卡那霉素抗性植株;轉(zhuǎn)化率為22%,每個(gè)外植體再生抗性不定芽數(shù)平均為5個(gè);轉(zhuǎn)化芽在生根培養(yǎng)基培養(yǎng)12 d后生出第一條根,生根率為66%。3.提取DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)表明Cjhppd基因整合到多裂葉荊芥基因組上。待轉(zhuǎn)化荊芥植株長(zhǎng)到株高5-6 cm將其移栽。經(jīng)過(guò)一個(gè)月得到移栽苗,移栽成活率為60%。提取RNA進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)表明Cjhppd基因在根、莖、葉中都有表達(dá)。從轉(zhuǎn)錄水平上說(shuō)明Cjhppd在轉(zhuǎn)基因荊芥基因組中表達(dá)。4.對(duì)轉(zhuǎn)Cjhppd荊芥植株葉片進(jìn)行除草劑抗性檢測(cè),結(jié)果表明:相同DTP濃度下,轉(zhuǎn)化植株白化程度明顯弱于野生植株。初步認(rèn)為,轉(zhuǎn)Cjhppd荊芥對(duì)除草劑DTP表現(xiàn)出一定的抗性。5.對(duì)轉(zhuǎn)Cjhppd荊芥植株進(jìn)行鹽脅迫處理,轉(zhuǎn)化荊芥在NaCl濃度為150 mmol/L時(shí)可以健康的生長(zhǎng),在200 mmol/L為時(shí)出現(xiàn)萎蔫;而野生型荊芥植株在50 mmol/L時(shí)就出現(xiàn)葉片發(fā)黃萎蔫的現(xiàn)象。6.對(duì)耐鹽性指標(biāo)測(cè)定結(jié)果表明:經(jīng)過(guò)不同濃度鹽脅迫后,野生型和轉(zhuǎn)化荊芥植株的脯氨酸含量、POD活性、MDA含量、CAT活性都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),轉(zhuǎn)化植株的指標(biāo)上升值明顯低于野生型。野生型植株葉綠素和類胡蘿卜素含量下降;轉(zhuǎn)化植株3種光合色素含量先上升后下降,而且在同一鹽濃度下含量高于野生型。鹽對(duì)類胡蘿卜素含量影響較大。初步說(shuō)明轉(zhuǎn)化植株對(duì)鹽脅迫表現(xiàn)出了一定的抗性,耐受濃度為150mmol/L。類胡蘿卜素可能與提高轉(zhuǎn)化植株耐鹽性相關(guān)。
[Abstract]:The transgenic plants were transformed with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 containing different concentrations of DTP and NaCl . The results showed that the content of proline , POD activity , MDA content and CAT activity of transgenic plants showed that the content of proline , POD activity , MDA content and CAT activity of transgenic plants were higher than those of wild plants .
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q943.2
【參考文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 梁銳中;;止嗽散合桑菊飲化裁治療感冒后咳嗽療效觀察[J];廣西中醫(yī)藥;2017年01期
2 陳海鷹;范正達(dá);朱珊梅;唐風(fēng)雷;;一種中藥空氣消毒劑中揮發(fā)油的抑菌活性研究[J];今日藥學(xué);2017年01期
3 張海芹;劉雅莉;張鋒;劉愛(ài)玲;;根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葡萄風(fēng)信子遺傳轉(zhuǎn)化體系[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2017年02期
4 張艷君;;荊芥連翹湯加減對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎患者血清TNF-α、IL-2的調(diào)節(jié)作用[J];山東中醫(yī)雜志;2016年11期
5 樊佳新;包永睿;孟憲生;王帥;;基于細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期研究荊芥總黃酮對(duì)Caco-2細(xì)胞的影響[J];中藥材;2016年08期
6 譚笑;高祥斌;;大花萱草耐鹽性研究[J];湖北農(nóng)業(yè)科學(xué);2016年12期
7 錢巖;于生;單鳴秋;姚衛(wèi)峰;張麗;;基于化學(xué)成分和藥理效應(yīng)的荊芥?zhèn)鹘y(tǒng)分段加工與一體化加工工藝比較[J];中國(guó)中藥雜志;2016年11期
8 張林u&;邵芬娟;秦利軍;;丹參不同愈傷組織誘導(dǎo)及遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化[J];廣西植物;2017年01期
9 孫婷;張?jiān)聦W(xué);尚晨;陳晶;張海玲;李佶愷;劉慧瑩;;鹽脅迫對(duì)苜蓿影響的研究進(jìn)展[J];黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué);2016年02期
10 趙立子;金鉞;韓曉敏;褚慶龍;魏建和;;北京、河北地區(qū)荊芥揮發(fā)油的GC特征圖譜[J];中成藥;2015年08期
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1 劉雯雯;多裂葉荊芥離體再生體系的建立及Cjhppd基因遺傳轉(zhuǎn)化[D];河北大學(xué);2014年
2 張?zhí)m英;轉(zhuǎn)Cjhppd基因煙草植株及BY2細(xì)胞耐鹽性分析[D];河北大學(xué);2011年
3 姚紅寶;黃連hppd基因在E.coli中表達(dá)產(chǎn)褐色素研究[D];河北大學(xué);2010年
4 張麗平;Cjhppd基因單子葉植物表達(dá)載體構(gòu)建及水稻的遺傳轉(zhuǎn)化[D];河北大學(xué);2009年
，
本文編號(hào)：2030955
本文鏈接：http://sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/2030955.html
本文選題：多裂葉荊芥(Nepeta + multifida) ； 參考：《河北大學(xué)》2017年碩士論文
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[Abstract]:The transgenic plants were transformed with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 containing different concentrations of DTP and NaCl . The results showed that the content of proline , POD activity , MDA content and CAT activity of transgenic plants showed that the content of proline , POD activity , MDA content and CAT activity of transgenic plants were higher than those of wild plants .
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：Q943.2
【參考文獻(xiàn)】
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4 張麗平;Cjhppd基因單子葉植物表達(dá)載體構(gòu)建及水稻的遺傳轉(zhuǎn)化[D];河北大學(xué);2009年
，本文編號(hào)：2030955
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