本文選題：中華蜜蜂 + 氣味結(jié)合蛋白�。� 參考：《山西農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：氣味結(jié)合蛋白(odorant binding proteins, OBPs)在昆蟲與外界進(jìn)行信息交流的過程中發(fā)揮著重要作用。中華蜜蜂(.Apis cerana cerana)作為我國原有的蜜蜂當(dāng)家品種,具有嗅覺靈敏、采集力強、善于利用零星蜜源植物、抗逆抗病能力強等意大利蜜蜂無法比擬的優(yōu)點,非常適合在我國的山林地區(qū)定地飼養(yǎng)。對中華蜜蜂OBPs的研究,不僅可以進(jìn)一步明確其嗅覺識別機制,還能夠為科學(xué)飼養(yǎng)管理及蜜蜂病害防治提供理論指導(dǎo)。本研究以中華蜜蜂為研究對象,利用分子生物學(xué)技術(shù)和生物信息學(xué)分析方法對中華蜜蜂氣味結(jié)合蛋白基因AcerOBP12、 AcerOBP13、 AcerOBP14和AcerOBP15的表達(dá)譜及編碼蛋白序列的生化特性、高級結(jié)構(gòu)等進(jìn)行研究,為該類蛋白的深入研究提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：(1)以中華蜜蜂全組織cDNA為模板,利用RT-PCR技術(shù)擴增和克隆獲得AcerOBP12、AcerOBP13、AcerOBP14 和 AcerOBP154個基因的cDNA序列,GenBank登錄號分別為KT279587、KT279586、KT24648、KT588076,開放閱讀框ORF分別為453bp、399bp、408bp、408bp,各編碼150、132、135、135個氨基酸。序列分析表明AcerOBP12和AcerOBP13屬于Classical OBP亞家族;AcerOBP14和AcerOBP15屬于Minus-C OBP亞家族。(2)生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,AcerOBP12、AcerOBP13、AcerOBP14和AcerOBP15在N端均有一段信號肽序列,無跨膜結(jié)構(gòu),均為分泌蛋白；氨基酸序列中都存在一個昆蟲氣味結(jié)合蛋白家族PBP-GOBP superfamily保守結(jié)構(gòu)域。AcerOBP12、AcerOBP 13和AcerOBP15蛋白具有6個α螺旋,構(gòu)成一個疏水的結(jié)合腔;AcerOBP14蛋白具有7個α螺旋,α1-α6屬于典型OBPs核心螺旋,α7位于C端且暴露在蛋白表面。(3)同源比對結(jié)果表明,AcerOBP12、AcerOBP13、AcerOBP14和AcerOBP15這4個蛋白序列間的同源性較低。而在系統(tǒng)進(jìn)化中AcerOBP12處于Classical OBP亞支,AcerOBP14和AcerOBP15處于Minus-C OBP亞支,而AcerOBP13位于Minus-C OBP亞支的根部。(4)采用Real-time PCR技術(shù)分析4個氣味結(jié)合蛋白基因在1、5、10、15、20、25和30日齡中華蜜蜂不同組織(觸角、頭、胸、腹、足和翅膀)中的表達(dá)情況。AcerOBP12、 AcerOBP13、AcerOBP14和AcerOBP15基因在成蜂各組織中均有表達(dá),但表達(dá)程度不一。AcerOBP12在各日齡中華蜜蜂觸角中的表達(dá)量均極顯著高于其它組織(P＜0.01),25日齡達(dá)到最高。AcerOBP13在各組織中的表達(dá)量總體上隨日齡增加而呈下降趨勢,1日齡的觸角、頭和胸部的表達(dá)量極顯著高于其它組織(P＜0.01)。AcerOBP14高表達(dá)于觸角中,其中20日齡工蜂的觸角表達(dá)量最高。AcerOBP15高表達(dá)于觸角和足中,腹部表達(dá)量顯著低于其它組織(P0.01);除頭部在10日齡表達(dá)量達(dá)到最高,其它各組織均在出巢采集之后達(dá)到最高,其中20日齡觸角表達(dá)量最高。(5)構(gòu)建了表達(dá)載體pEASY/AcerOBP14,以終濃度為1.0 mM的IPTG誘導(dǎo)重組質(zhì)粒在表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3)中表達(dá)。原核表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳,得到的融合蛋白條帶大小與預(yù)測分子量一致,且以包涵體的形式表達(dá)。重組蛋白的成功誘導(dǎo)為進(jìn)一步研究中華蜜蜂氣味結(jié)合蛋白與氣味分子的結(jié)合特性及功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:This paper studies the expression profiles of AcerOBP12 , AcerOB13 , AcerOB14 and AcerOBP154 genes in China . The results are as follows : ( 1 ) The research of Apis cerana cerana cerana ( Apis cerana cerana ) is very suitable for the research of Chinese honeybees . The results are as follows : ( 1 ) The research of the Chinese bee ' s OBPs can not only clarify its olfactory recognition mechanism , but also provide theoretical guidance for the scientific breeding management and the prevention and control of bee diseases .
The expression of AcerOBP12 , AcerOB13 , AcerOB14 and AcerOBp15 was higher than that in other tissues ( P & lt ; 0.01 ) .
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S891;Q78

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本文編號：2003824