本文選題：陽離子脂質(zhì)體 + 陽離子類脂　； 參考：《廣東藥科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：基因治療就是將某種目的基因?qū)氩∪说捏w細(xì)胞內(nèi),使之表達(dá),以達(dá)到治病疾病的目的。到目前為止,全世界范圍內(nèi)已經(jīng)批準(zhǔn)的基因治療臨床實(shí)驗(yàn)方案已經(jīng)超過1800項(xiàng),盡管如此,基因治療仍未取得突破性的進(jìn)展。當(dāng)前,基因治療的載體主要有病毒載體和非病毒載體兩大類。病毒型載體(如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒載體、單純皰疹病毒載體等)雖然具有較高的轉(zhuǎn)染效率,但它存在潛在毒性、免疫源性、致突變性等安全問題,同時它制備復(fù)雜,所載的外源DNA能力有限等,使其應(yīng)用受到很大的限制,據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)患者使用高轉(zhuǎn)染效率逆轉(zhuǎn)錄病毒載體后有九分之二會引發(fā)白血病;非病毒型載體主要有陽離子聚合物、陽離子脂質(zhì)體等,是基因載體最新發(fā)展和重要補(bǔ)充,具有包封率高、免疫源性低、安全性好、靶向性強(qiáng)、可批量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn),已成為目前國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。陽離子端基肽類脂是一類具有兩親性質(zhì)的化合物,一個由氨基酸的氨基端�；纬傻孽０锋I連接親水的頭部,羧基端與長碳鏈氨基化合物脫水形成。極性頭部起著脂質(zhì)體與DNA、脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物與細(xì)胞膜或與細(xì)胞內(nèi)其他組分相互結(jié)合的作用,連接鍵決定了陽離子類脂的化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和生物降解性。PAMAM的末端基團(tuán)精確可控,作為藥物載體和基因載體具有較高的穩(wěn)定性、生物相容性良好、無免疫源性,0代PAMAM具備樹枝狀化合物特點(diǎn)易合成無毒。月桂酸(Lauric acid),又稱為十二烷酸,是一種飽和脂肪酸,其心血管疾病風(fēng)險比其他飽和脂肪酸都要低。本陽離子類脂以雙十二烷酸為疏水鏈,陽離子的輸水區(qū)的主要功能是既為脂質(zhì)雙層提供足夠的流動性,又能使脂質(zhì)雙層膜維持一定的剛性,以便為陽離子脂質(zhì)體與體內(nèi)的脂質(zhì)融合創(chuàng)造條件;l-酒石酸(l-tartaricacid)2,3-二羥基丁二酸,是一種羧酸,無毒,生物相容性好;賴氨酸(lysine)是人體必需氨基酸之一,無毒、生物相容性好的優(yōu)點(diǎn),能促進(jìn)人體發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能,能抑制單純皰疹病毒的復(fù)制,對心絞痛、心肌梗死和肝臟疾病有預(yù)防作用。以雙月桂酰為疏水鏈,酒石酸為骨架,賴氨酸修飾的0代pamam為親水性頭部,合成新型陽離子端基肽類脂。烷基鏈有利于類脂體透過細(xì)胞膜和細(xì)胞膜相融合,賴氨酸修飾的0代pamam親水端含大量的氨基可質(zhì)子化成為銨基,與dna中帶負(fù)電荷的磷酸基團(tuán)結(jié)合預(yù)期本載體具有低毒、高轉(zhuǎn)染效率。通過調(diào)節(jié)陽離子脂質(zhì)體/基因重量比等方面優(yōu)化該傳遞系統(tǒng),提高基因轉(zhuǎn)染效率、降低細(xì)胞毒性、提高載體穩(wěn)定性等。主要研究內(nèi)容:(1)雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子類脂的化學(xué)合成和結(jié)構(gòu)表征:采用中文名稱:十二酰氯(lauroylchloride)與l-酒石酸(l-tartaricacid)2,3-二羥基丁二酸在無水碳酸鈉(sodiumcarbonateanhydrous)條件下發(fā)生酯化反應(yīng)得雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys。雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys、0-gpamam和氨基受保護(hù)的賴氨酸(bis(n,n′-tert-butoxycarbonyl)lysineacid)在n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)、n,n-二異丙基碳二亞胺(dic)活化劑條件下反應(yīng),最后經(jīng)三氟乙酸(trifluoroaceticacid)酸化得產(chǎn)物,產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)由紅外(ir)和核磁共振氫譜(1h-nmr)等鑒定。(2)雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子脂質(zhì)體的基因載體的性能考察:采用動態(tài)光散射法測定了雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子脂質(zhì)體/dna復(fù)合物的粒徑分布及表面電位;通過瓊脂糖凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)考察雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子脂質(zhì)體結(jié)合并壓縮dna的能力。發(fā)現(xiàn)雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子脂質(zhì)體與dna復(fù)合后粒徑減小至200nm以內(nèi),形成致密的納米粒且復(fù)合物具有稀釋穩(wěn)定性。(3)雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性:用mtt法考察雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子脂質(zhì)體對不同腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性,并考察雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子脂質(zhì)體的不同比例下的毒性。結(jié)果顯示相同濃度下細(xì)胞毒性低于脂質(zhì)體2000。(4)雙月桂酰酒石酸脂-pamam-lys陽離子脂質(zhì)體的體外轉(zhuǎn)染研究:用hepg2細(xì)胞對雙月桂酰酒石酸脂-PAMAM-Lys陽離子脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物的最佳轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行篩選并考察雙月桂酰酒石酸脂-PAMAM-Lys陽離子脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物在不同細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)染與lipofectamine 2000相比較,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雙月桂酰酒石酸脂-PAMAM-Lys陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率低于脂質(zhì)體2000。
[Abstract]:The present invention has the advantages of high encapsulation efficiency , low immunity , high safety , strong targeting property and high biocompatibility , and can promote the development of human body , enhance immunity and inhibit the replication of herpes simplex virus . The particle size distribution and surface potential of bis ( lauryltartaric acid ) - pammartrate cationic liposome / dna complexes were determined by dynamic light scattering method . The cytotoxicity of bis ( lauryltartaric acid ) - pammartrate cationic liposome was investigated by means of agarose gel block experiment .
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R450

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本文編號：2002278