如皋黃雞功能未知基因C1EIP表達(dá)載體的構(gòu)建及其抗小鼠血清制備
本文選題:如皋黃雞 + CEIP ; 參考:《中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年06期
【摘要】:為了深入研究雞胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell,ESC)向雄性生殖細(xì)胞分化過(guò)程,基于RNA-Seq基礎(chǔ),篩選出功能未知且差異極其顯著的關(guān)鍵基因C1EIP,PCR克隆得到其編碼區(qū)全長(zhǎng)序列409bp,構(gòu)建其真核表達(dá)載體pcDNA3.0-C1EIP和pEGFP-C1EIP,實(shí)現(xiàn)C1EIP在真核細(xì)胞內(nèi)的定位表達(dá),并以PEI包裹pcDNA3.0-C1EIP后免疫小鼠制備抗血清。間接免疫熒光檢測(cè)抗血清效價(jià)為1∶10,RT-PCR和Western blot證實(shí)C1EIP真核表達(dá)載體成功表達(dá)且抗血清效果良好,為C1EIP基因在ESCs向雄性生殖細(xì)胞分化過(guò)程中的功能研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to study the differentiation process of embryonic stem cells from embryonic stem cells to male germ cells, based on RNA-Seq. The full length sequence of the encoding region of the key gene C1EIPP was cloned and cloned. The eukaryotic expression vectors pcDNA3.0-C1EIP and pEGFP-C1EIPP were constructed to realize the localization expression of C1EIP in eukaryotic cells, and the mice were immunized with PEI to prepare antiserum. Indirect immunofluorescence assay showed that the antiserum titer was 1: 10% RT-PCR and Western blot confirmed that the C1EIP eukaryotic expression vector was successfully expressed and the antiserum effect was good, which laid a foundation for the study of the function of C1EIP gene in the process of ESCs differentiation into male germ cells.
【作者單位】: 揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31272429 31472087) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助課題資助項(xiàng)目(20103250110006) 江蘇省“六大人才高峰”資助項(xiàng)目 江蘇省優(yōu)勢(shì)學(xué)科資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】:S831
【參考文獻(xiàn)】
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【共引文獻(xiàn)】
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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】
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【相似文獻(xiàn)】
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,本文編號(hào):1986571
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