本文選題：pedA基因 + 片球菌素PA-��； 參考：《生物技術(shù)通報(bào)》2017年12期

【摘要】：旨在構(gòu)建片球菌素PA-1結(jié)構(gòu)基因pedA的原核表達(dá)載體,在大腸桿菌體系中實(shí)現(xiàn)PA-1的外源表達(dá),運(yùn)用生物信息學(xué)手段分析重組蛋白的理化性質(zhì)及分子結(jié)構(gòu)。以戊糖片球菌C-2-1的DNA為模板,擴(kuò)增pedA基因,擴(kuò)增產(chǎn)物克隆入pET28a(+)原核表達(dá)載體,構(gòu)建pET28a-ped A重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)中;30℃,以1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá)5 h;采用Ni-NTA樹脂親和層析純化重組蛋白,檢測(cè)純化后重組蛋白的抑菌活性;利用生物信息學(xué)手段探究重組蛋白的理化性質(zhì)及分子結(jié)構(gòu)信息。結(jié)果顯示,pET28a-ped A重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,帶有His標(biāo)簽的PA-1重組片球菌素在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了可溶性表達(dá),利用Ni-NTA親和層析獲得純化的重組蛋白,Tricine-SDS-PAGE電泳分析表明純化后的重組蛋白分子量約為7.8 k D,與理論值相符。瓊脂擴(kuò)散法抑菌活性實(shí)驗(yàn)抑菌圈效果明顯,表明純化的重組片球菌素具有抑菌活性。生物信息學(xué)方法對(duì)比分析其蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),獲得的重組蛋白含有信號(hào)肽,α螺旋占23.53%,疏水性提高,可能促進(jìn)了重組蛋白的可溶性表達(dá)。該實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了片球菌素PA-1的原核表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)了在大腸桿菌中的可溶性表達(dá),該表達(dá)可能與其含有信號(hào)肽及信號(hào)肽疏水性有關(guān),純化后的重組蛋白抑菌活性明顯。
[Abstract]:In order to construct the prokaryotic expression vector of nisin PA-1 structural gene pedA and realize the exogenous expression of PA-1 in Escherichia coli system, the physicochemical properties and molecular structure of the recombinant protein were analyzed by bioinformatics. The pedA gene was amplified from the DNA of Streptococcus pentose C-2-1 and cloned into the prokaryotic expression vector pET28a (). The recombinant plasmid of pET28a-ped A was constructed and transferred into E. coli BL21 (DE3) at 30 鈩，

本文編號(hào)：1981198