發(fā)布時(shí)間：2018-06-02 17:44

  本文選題：尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶 + 霉酚酸酯��； 參考：《中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志》2017年12期

【摘要】：目的體外研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UGT1A10)基因SNP rs10187694多態(tài)位點(diǎn)G/A變異對嗎替麥考酚酯(MMF)代謝的影響,明確該位點(diǎn)變異是否與MMF個(gè)體代謝差異有關(guān)。方法采用基因重組、定點(diǎn)突變技術(shù),構(gòu)建UGT1A10基因SNP rs10187694位點(diǎn)含有不同等位基因的重組過表達(dá)載體,POLO 3000轉(zhuǎn)染法將重組過表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入HEK293細(xì)胞,采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC/MS/MS)系統(tǒng),檢測霉酚酸(MPA)代謝產(chǎn)物7-O-葡醛酸苷(MPAG)的生成量,以評估轉(zhuǎn)染不同等位基因HEK293細(xì)胞中酶的活性。結(jié)果成功構(gòu)建pIRES2-EGFP-prom(G)和pIRES2-EGFP-prom(A)重組過表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。LC/MS/MS系統(tǒng)檢測結(jié)果顯示,攜帶A等位基因的突變型UGT1A10代謝MMF產(chǎn)生MPAG的能力降低,其24 h MPAG的生成量為(226.00±14.57)nmol/L,而野生型的生成量為(269.00±14.07)nmol/L,UGT1A10突變型MPAG的生成量是野生型的84.00%,兩者比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 UGT1A10基因SNP rs10187694位點(diǎn)G/A突變可影響MMF代謝產(chǎn)物MPAG的生成,可能是造成不同個(gè)體MMF代謝差異的重要原因之一。
[Abstract]:Objective to study the effect of SNP rs10187694 polymorphism of uridine diphosphate glucuronyltransferase (UGT1A10) gene on the metabolism of mycophenolate mofetil (MMF) in vitro, and to determine whether this mutation is related to the individual metabolic difference of MMF. Methods using gene recombination and site-directed mutagenesis technique, a recombinant overexpression vector containing different alleles in SNP rs10187694 locus of UGT1A10 gene was constructed. The recombinant overexpression vector was transfected into HEK293 cells with different alleles. The recombinant overexpression vector was transfected into HEK293 cells by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) system. The production of 7-Ouronic acid glucuronide (7-Ouronoside) metabolite was determined to evaluate the enzyme activity in HEK293 cells transfected with different alleles. Results Recombinant expression vectors pIRES2-EGFP-prompromG and pIRES2-EGFP-prompromA) were successfully constructed and transfected into HEK293 cells. The results of MS / MS system analysis showed that the ability of mutant UGT1A10 carrying A allele to metabolize MMF to produce MPAG was decreased. The production of 24 h MPAG was 226.00 鹵14.57 nmol / L, while that of wild type was 269.00 鹵14.07 nmol / L, the production of UGT1A10 mutant MPAG was 84.00% of that of wild type, the difference was statistically significant (P 0.05). Conclusion the G / A mutation at SNP rs10187694 site of UGT1A10 gene may affect the production of MMF metabolite MPAG, which may be one of the important reasons for the difference of MMF metabolism in different individuals.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院普外科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No:81270557,81110108010)
【分類號】：R96

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本文編號：1969634