本文選題：苯 + XPD基因��； 參考：《貴州醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:探討XPD基因甲基化及表達在苯致SD大鼠造血組織損傷中的作用及其可能的機制。方法:30只雄性SD大鼠被隨機分為5組,每組6只,分別為空白對照組(未經(jīng)任何處理)、溶劑對照組(玉米油)、苯低劑量組(200mg/kg)、苯中劑量組(400mg/kg)、苯高劑量組(800mg/kg),除空白對照組外,各處理組每天灌胃1次,連續(xù)28天。灌胃染毒結(jié)束后1.HE染色觀察股骨的病理組織學(xué)結(jié)構(gòu)改變;2.采用單細(xì)胞凝膠電泳(SCGE)檢測外周血細(xì)胞及骨髓細(xì)胞DNA損傷情況;3.采用實時熒光定量PCR法檢測骨髓細(xì)胞中XPD基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平;4.免疫印跡法(WB)檢測骨髓細(xì)胞XPD蛋白的表達水平;5.采用重亞硫酸鹽測序法(BSP)檢測血液及骨髓細(xì)胞中XPD基因甲基化狀態(tài)。結(jié)果:1.病理組織學(xué)結(jié)果顯示,隨著染毒劑量的增加,苯染毒組骨小梁出現(xiàn)明顯斷裂現(xiàn)象,軟骨細(xì)胞層排列更加紊亂,破裂細(xì)胞增多,骨髓造血細(xì)胞減少,脂肪滴增多;2.SCGE結(jié)果提示,苯染毒可致外周血及骨髓細(xì)胞DNA損傷,且損傷效應(yīng)隨著染毒濃度增加而增大;3.Taqman探針實時定量PCR法結(jié)果顯示,空白對照組、溶劑對照組、苯低、中、高劑量組骨髓細(xì)胞XPD mRNA相對表達量分別為0.600±0.0484、0.454±0.331、0.501±0.446、1.068±0.666、1.072±0.047,與空白對照組比較,苯各染毒組均表達升高,且苯染毒中、高劑量組與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);4.WB檢測結(jié)果顯示,空白對照組、溶劑對照組、苯染毒低、中、高劑量組XPD蛋白的表達量分別為(102.78±2.32)%、(100.00±0.00)%、(135.68±13.67)%、(154.48±9.78)%、(176.55±11.05)%,苯染毒各劑量組與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),且苯染毒各劑量組之間比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);5.BSP結(jié)果顯示,空白對照組、溶劑對照組、苯低、中、高劑量組的骨髓細(xì)胞甲基化率分別為0.60%、0.30%、1.40%、1.10%、0.80%,苯染毒組與對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);各組外周血細(xì)胞甲基化率分別為2.20%、0.80%、3.10%、1.70%、2.20%,苯染毒各劑量組與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:苯對SD大鼠血液及骨髓細(xì)胞均具有DNA損傷作用,其機制可能與上調(diào)XPD基因表達有關(guān),而XPD基因甲基化可能未參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程。
[Abstract]:Aim: to investigate the role and possible mechanism of methylation and expression of XPD gene in hematopoietic tissue injury of SD rats induced by benzene. Methods 30 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 5 groups, 6 rats in each group. They were divided into five groups: blank control group (without any treatment), solvent control group (corn oil, benzene low dose group, benzene low dose group), benzene middle dose group (400 mg / kg), benzene high dose group (800 mg / kg), except blank control group. Each treatment group was gavaged once a day for 28 days. The histopathological changes of femur were observed by 1.HE staining after oral administration. Single cell gel electrophoresis (SCGE) was used to detect DNA damage in peripheral blood cells and bone marrow cells. The mRNA transcription level of XPD gene in bone marrow cells was detected by real-time fluorescence quantitative PCR assay. The expression of XPD protein in bone marrow cells was detected by Western blot. The methylation status of XPD gene in blood and bone marrow cells was detected by bisulfite sequencing. The result is 1: 1. The histopathological results showed that the bone trabeculae in benzene exposed group were obviously broken with the increase of dose, the arrangement of chondrocytes was more disordered, the number of ruptured cells was increased, the hematopoietic cells of bone marrow were decreased, and the fat droplets were increased. Benzene exposure induced DNA damage in peripheral blood and bone marrow cells, and the damage effect increased with the increase of concentration of benzene. The results of real-time quantitative PCR with Taqman probe showed that: blank control group, solvent control group, benzene low, medium, middle, low, middle, low benzene, low benzene, The relative expression of XPD mRNA in bone marrow cells in the high dose group was 0.600 鹵0.0484 鹵0.454 鹵0.331U 0.501 鹵0.446U 1.068 鹵0.666U 1.072 鹵0.0477.Compared with the blank control group, the expression of XPD mRNA in the high dose group was higher than that in the blank control group, and the difference between the high dose group and the blank control group was statistically significant (P 0.05) 4.WB. The expression of XPD protein in the middle and high dose groups were 102.78 鹵2.32, 100.00 鹵0.005 鹵135.68 鹵13.67 and 154.48 鹵9.780.55 鹵11.05, respectively. The difference between each dose group of benzene exposure and the control group was statistically significant (P 0.05). The results of BSP showed that the methylation rates of bone marrow cells in the blank control group, solvent control group, benzene low, medium and high dose group were 0.600.30 and 1.40 and 1.100.80, respectively. The methylation rate of peripheral blood cells in each group was 2.20 / 0.80 and 3.100.70 / 2.20 respectively. There was no significant difference between each dose group and the control group (P 0.05). Conclusion: benzene can damage DNA in blood and bone marrow cells of SD rats, and its mechanism may be related to up-regulation of XPD gene expression, while methylation of XPD gene may not participate in the process of transcriptional regulation.
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R114

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本文編號：1968826