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楊樹(shù)酚酸糖基轉(zhuǎn)移酶基因PtSGT1的克隆及其酶活性鑒定

發(fā)布時(shí)間:2018-05-31 19:01

  本文選題:楊樹(shù) + 酚酸類(lèi)代謝 ; 參考:《植物生理學(xué)報(bào)》2016年06期


【摘要】:酚酸類(lèi)物質(zhì)在植物抵御病蟲(chóng)害方面發(fā)揮著重要作用,并且與木質(zhì)素、類(lèi)黃酮以及水楊酸等物質(zhì)合成密切關(guān)聯(lián),因此,研究酚酸代謝調(diào)節(jié)具有重要意義。為了研究楊樹(shù)中酚酸物質(zhì)的糖基化代謝修飾,本文以毛白楊為實(shí)驗(yàn)材料,采用RT-PCR技術(shù)分離克隆了糖基轉(zhuǎn)移酶基因PtSGT1。序列分析表明,該基因編碼蛋白中含有次生代謝特征性的保守序列PSPG框。然后構(gòu)建了其原核表達(dá)載體并在細(xì)菌中誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)過(guò)提取和純化獲得了PtSGT1重組蛋白。對(duì)該重組蛋白進(jìn)行了廣泛的酶活性篩選,對(duì)催化產(chǎn)物進(jìn)行了色譜和質(zhì)譜鑒定,發(fā)現(xiàn)該酶特異性地糖基化修飾酚酸類(lèi)物質(zhì),而對(duì)其他類(lèi)型化合物沒(méi)有催化活性,證明PtSGT1是參與楊樹(shù)酚酸類(lèi)代謝修飾的糖基轉(zhuǎn)移酶。另外,分析了PtSGT1基因在楊樹(shù)9種不同組織的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)該基因在老葉以及老莖中表達(dá)水平高,說(shuō)明該糖基轉(zhuǎn)移酶在體內(nèi)可能與酚酸等次生代謝物的修飾、解毒、儲(chǔ)藏等有關(guān)。本工作首次表明楊樹(shù)體內(nèi)存在著酚酸代謝物的糖基化修飾酶和修飾途徑,為楊樹(shù)的酚酸代謝調(diào)節(jié)研究以及病蟲(chóng)害防治奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Phenolic acids play an important role in plant resistance to pests and diseases, and are closely related to lignin, flavonoids and salicylic acid synthesis. Therefore, it is of great significance to study the regulation of phenolic acid metabolism. In order to study the glycosylation and metabolic modification of phenolic acid in poplar, the glycosyltransferase gene PtSGT1 was isolated and cloned from Populus tomentosa by RT-PCR technique. Sequence analysis showed that the gene encoded protein contained conserved sequence PSPG frame with characteristic of secondary metabolism. Then the prokaryotic expression vector was constructed and expressed in bacteria. The recombinant PtSGT1 protein was extracted and purified. The recombinant protein was extensively screened for enzyme activity, and the catalytic product was identified by chromatography and mass spectrometry. It was found that the enzyme was specifically glycosylated to modify phenolic acids, but had no catalytic activity for other types of compounds. It is proved that PtSGT1 is a glycosyltransferase involved in the metabolic modification of poplar phenolic acids. In addition, the expression level of PtSGT1 gene in 9 different tissues of poplar was analyzed. It was found that the expression level of PtSGT1 gene was high in the old leaves and stems, indicating that the glycosyltransferase might be modified with phenolic acid and other secondary metabolites in vivo and detoxified. Relating to storage, etc. This work for the first time indicated that there were glycosylation modifiers and pathways of phenolic acid metabolites in poplar, which laid a foundation for the study of phenolic acid metabolism regulation and the control of diseases and insect pests in poplar.
【作者單位】: 齊魯師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;山東大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】:國(guó)家自然科學(xué)基金(31570299) 植物細(xì)胞工程與種質(zhì)創(chuàng)新教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(201103)~~
【分類(lèi)號(hào)】:Q943.2;S792.11

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本文編號(hào):1960941

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