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木薯MeNRT2.1基因的克隆及表達(dá)分析

發(fā)布時(shí)間:2018-05-30 18:26

  本文選題:木薯 + 硝態(tài)氮; 參考:《熱帶作物學(xué)報(bào)》2016年01期


【摘要】:木薯具有產(chǎn)量高、抗貧瘠等特點(diǎn),為了了解其耐貧瘠的作用機(jī)理,提高木薯在貧瘠土壤中對(duì)氮素的利用率,以培養(yǎng)20 d的"華南5號(hào)"木薯組培苗為實(shí)驗(yàn)材料,采用同源克隆和RT-PCR技術(shù),獲得一個(gè)高親和硝態(tài)氮轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(NRT2)基因,命名為Me NRT2.1,該基因含有1 593 bp的開(kāi)放閱讀框架,編碼530個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,木薯Me NRT2.1與苜蓿、擬南芥、可可、楊樹(shù)等物種的NRT2.1同源性高,其中與可可樹(shù)Tc NRT2.1的親緣關(guān)系最近,氨基酸相似性達(dá)到90%。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明,Me NRT2.1在木薯組培苗的根中表達(dá),并且在NO_3~-濃度為0.2 mmol/L時(shí),其相對(duì)表達(dá)量較高,NO_3~-濃度為10 mmol/L時(shí)其相對(duì)表達(dá)量較低,NO_3~-濃度為0時(shí)幾乎不表達(dá);Me NRT2.1在莖、葉中也幾乎不表達(dá),即該基因具有誘導(dǎo)型組織特異性表達(dá)模式。原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)發(fā)現(xiàn)Me NRT2.1定位在細(xì)胞膜上。此研究為進(jìn)一步通過(guò)NRT2基因提高木薯的抗逆性奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Cassava has the characteristics of high yield and resistance to barren. In order to understand its mechanism of tolerance to barren, and to improve the utilization rate of nitrogen in barren soil, the tissue culture seedling of "South China No.5" cassava was cultured for 20 days as the experimental material. By using homologous cloning and RT-PCR techniques, a highly compatible nitrate-nitrogen transporter (NRT2) gene was obtained, named me NRT2.1, which contains an open reading frame of 1 593bp and encodes 530 amino acids. Bioinformatics analysis showed that me NRT2.1 had high NRT2.1 homology with alfalfa, Arabidopsis thaliana, cocoa, poplar and so on. The results of real-time fluorescence quantitative PCR showed that me NRT2.1 was expressed in the roots of cassava plantlets in tissue culture, and the relative expression of me NRT2.1 was relatively high when the concentration of NO3- was 0.2 mmol/L. When the concentration was 10 mmol/L, the relative expression of me NRT2.1 was almost non-expressed in stems. There was almost no expression in leaves, that is, the gene had inducible tissue specific expression pattern. It was found that me NRT2.1 was located on the cell membrane by transient expression in protoplasts. This study laid a foundation for further enhancing the stress resistance of cassava by NRT2 gene.
【作者單位】: 海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院;中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所農(nóng)業(yè)部熱帶作物生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】:國(guó)際科技合作與交流項(xiàng)目(No.2013DFA32020) 海南省重大科技項(xiàng)目子課題熱帶生物種質(zhì)與基因資源研究(No.ZDZX2013023-1) 國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(No.2012AA101204)
【分類號(hào)】:S533

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本文編號(hào):1956325

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