發(fā)布時(shí)間：2018-05-29 16:47

  本文選題：sfm基因 + Red同源重組系統(tǒng)��； 參考：《中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年12期

【摘要】：為研究產(chǎn)腸毒素大腸桿菌菌株F4ac(F4ac~+ETEC)菌毛粘附素sfm基因的功能,本研究利用Red同源重組方法對(duì)F4ac+ETEC的sfm基因進(jìn)行敲除,構(gòu)建缺失株F4acΔsfm。再將sfm基因克隆到表達(dá)載體pACYC184中,獲得重組質(zhì)粒pACYC184-sfm,并轉(zhuǎn)化至F4acΔsfm得到回補(bǔ)株F4acΔsfm/psfm。對(duì)ETEC野生菌、缺失株和回補(bǔ)株的生長(zhǎng)曲線進(jìn)行了測(cè)定和比較,結(jié)果顯示sfm的缺失和回補(bǔ)對(duì)F4ac~+ETEC的生長(zhǎng)沒(méi)有影響;生物被膜定性和定量試驗(yàn)結(jié)果一致:均表明sfm在F4ac~+ETEC生物被膜形成的過(guò)程中作用不明顯;血凝試驗(yàn)和甘露糖敏感性血凝試驗(yàn)結(jié)果顯示3種類型的菌株均能夠與2%豬血紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng),且該凝集現(xiàn)象能被D-甘露糖抑制。本研究為進(jìn)一步研究sfm菌毛粘附素功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to study the function of sfm gene of Enterotoxigenic Escherichia coli strain F4ac-F4ac-ETEC, the sfm gene of F4ac ETEC was knockout by Red homologous recombination method, and the missing strain F4ac 螖 sfm was constructed. The sfm gene was cloned into the expression vector pACYC184, and the recombinant plasmid pACYC184-sfm was obtained, and then transformed into F4ac 螖 sfm to obtain the complementary strain F4ac 螖 sfm / psfm. The growth curves of wild bacteria, missing plants and supplementary plants of ETEC were measured and compared. The results showed that the absence and compensation of sfm had no effect on the growth of F4ac- ETEC. The qualitative and quantitative results of biofilm showed that sfm did not play a significant role in the formation of F4ac- ETEC biofilm. The results of hemagglutination test and mannose sensitive hemagglutination test showed that all three strains could agglutinate with 2% porcine red blood cells, and the agglutination could be inhibited by Dmannose. This study laid a foundation for further study of the function of sfm pili adhesion hormone.
【作者單位】： 揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;江蘇省家禽科學(xué)研究所;國(guó)藥集團(tuán)揚(yáng)州威克生物工程有限公司;
【基金】：科技部畜禽重大疫病防控與高效安全養(yǎng)殖綜合技術(shù)研發(fā)重點(diǎn)專項(xiàng)(2016YFD0500900);科技部轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)(2014ZX08006-001B) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31672579、31270171、31072136、31502075、30771603) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK20150442) 江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：1951654