發(fā)布時(shí)間：2018-05-27 17:14

  本文選題：電針耐受 + miRNA　； 參考：《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：細(xì)胞內(nèi)miRNA能與mRNA 3‘UTR區(qū)結(jié)合,干擾基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)。近些年在有關(guān)miRNA與疼痛的研究越來(lái)越受到人們的關(guān)注。研究表明miRNA let-7b在傷害感受器神經(jīng)元中可通過TLR7/TRPA1影響疼痛。電針耐受是反復(fù)或持續(xù)電針引起的電針鎮(zhèn)痛效應(yīng)下降,是針刺治療疼痛性疾病時(shí)的一種負(fù)調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)室利用miRNA深度測(cè)序與側(cè)腦室注射對(duì)應(yīng)的agomir、antagomir,發(fā)現(xiàn)let-7b-5p在電針耐受中可能發(fā)揮著重要作用。利用靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)Dusp1基因可能是let-7b-5p的靶基因。Dusp1基因轉(zhuǎn)錄、翻譯成MKP-1,MKP-1是一類雙向特異性蘇/酪氨酸磷酸酯酶,不僅能使磷酸化的蘇氨酸/絲氨酸去磷酸化,還可使磷酸化的酪氨酸去磷酸化。此外,MKP-1的特異性選擇底物是p38,p38亦與炎癥、疼痛有密切關(guān)系。另有研究表明,干擾MKP-1的活性,可調(diào)節(jié)MAPKs分子信號(hào)通路,進(jìn)而減少疼痛發(fā)生,延緩疼痛發(fā)展。電針相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)電針能顯著降低足底炎性痛大鼠大腦核團(tuán)中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)、延腦頭端腹內(nèi)側(cè)核及脊髓背角p38MAPK的磷酸化水平,證明了MAPK信號(hào)通路在電針鎮(zhèn)痛中的重要作用。本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了let-7b-5p在大鼠神經(jīng)元細(xì)胞中能干擾Dusp1基因的轉(zhuǎn)錄后水平,并進(jìn)一步探索大鼠下丘腦中,let-7b-5p是否通過干擾Dusp1基因和(或)MKP-1蛋白表達(dá)量影響電針耐受。通過體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞與轉(zhuǎn)染雙熒光素報(bào)告酶載體,試驗(yàn)組與對(duì)照組相比,let-7b-5p顯著抑制了psi CHECK2-Dusp1-3‘UTR-WT雙熒光素酶報(bào)告載體的熒光活性,證明let-7b-5p的靶基因?yàn)镈usp1基因。后續(xù)試驗(yàn)選擇6周齡雌性健康SD大鼠,共54只,體重210±20g。隨機(jī)分成Ago+EA組、Atg+EA組和CT+EA組,每組18只。其中,Ago+EA組大鼠接受側(cè)腦室注射agomir-let-7b-5p;Atg+EA組大鼠接受側(cè)腦室注射antagomir-let-7b-5p;CT+EA組大鼠接受側(cè)腦室注射stable negative control(隨機(jī)堿基序列),側(cè)腦室注射完成后立即對(duì)試驗(yàn)大鼠左后肢足底趾面注射0.1m L完全弗氏佐劑(CFA),建立炎癥疼痛模型。完成注射后24h,電針試驗(yàn)大鼠雙側(cè) 足三里‖及 三陰交‖穴,每次持續(xù)30min,每天1次,共電針7次;每次電針前后,測(cè)定試驗(yàn)大鼠足底機(jī)械觸痛閾和鼠尾熱輻射痛閾值。于電針第1d、4d、7d,各組隨機(jī)挑選6只,取下丘腦,用于測(cè)量下丘腦中MKP-1蛋白表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:電針第1d至第4d,Atg+EA組大鼠足底機(jī)械痛閾變化率均顯著高于Ago+EA組大鼠(p0.05);電針第1d與第3d,Ago+EA大鼠足底機(jī)械痛閾變化顯著低于CT+EA組。測(cè)量大鼠鼠尾熱輻射痛閾變化率,發(fā)現(xiàn)電針第1d至第7d Atg+EA組與Ago+EA組相比痛閾變化率均顯著升高(p0.05),電針第5d至第7d痛閾變化率Atg+EA組顯著高于CT+EA組(p0.05);電針第1 d、3 d與4 d,Ago+EA大鼠足底機(jī)械痛閾變化顯著低于CT+EA組(p0.05)。MKP-1蛋白表達(dá)量測(cè)定顯示,電針第1d,Ago+EA組MKP-1表達(dá)量相較其他兩組顯著降低(p0.05);電針第4d,CT+EA組MKP-1蛋白表達(dá)量與Atg+EA組沒有顯著差異(p0.05),但Ago+EA組MKP-1表達(dá)量仍顯著低于另兩組(p0.05);電針第7d,Atg+EA組MKP-1表達(dá)量顯著高于另兩組(p0.05),CT+EA組與Ago+EA組相比沒有顯著性差異(p0.05)。本實(shí)驗(yàn)通過體外靶基因驗(yàn)證和體內(nèi)痛閾變化率和MKP-1蛋白表達(dá)水平的檢測(cè),確定了在大鼠下丘腦中,let-7b-5p可通過干擾Dusp1基因并影響MKP-1蛋白表達(dá)量影響電針耐受的形成。
[Abstract]:緇嗚優(yōu)鍐卪iRNA鑳戒笌mRNA 3鈥楿TR鍖虹粨鍚，

本文編號(hào)：1943079