本文選題：卵巢腫瘤 + 組蛋白賴氨酸去甲基化酶�。� 參考：《腫瘤》2016年05期

【摘要】：目的 :研究賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶(1lysine-specific demethylase 1,LSD1)表達(dá)下調(diào)及其酶活性下降對(duì)人卵巢癌HO8910細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法:采用慢病毒感染系統(tǒng)將攜帶有特異性針對(duì)LSD1基因的LSD1-shRNA重組慢病毒載體(pLKO-Tet-On-LSD1-shRNA)轉(zhuǎn)入HO8910細(xì)胞,并用嘌呤霉素(puromycin)篩選LSD1-shRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)入的HO8910細(xì)胞(HO8910-LSD1-shRNA細(xì)胞);采用不同質(zhì)量濃度的多西環(huán)素(doxycycline,Dox)(1、10和100 ng/m L)處理HO8910-LSD1-shRNA細(xì)胞,并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法分別檢測(cè)細(xì)胞中LSD1 mRNA和蛋白以及組蛋白(histones)H3第4位賴氨酸的二甲基化(H3K4me2)蛋白表達(dá)的變化。分別用LSD1特異性抑制劑苯環(huán)丙胺(tranylcypromine,TCP)和Dox處理HO8910細(xì)胞和HO8910-LSD1-shRNA細(xì)胞后,用MTT法和EdU染色法檢測(cè)細(xì)胞的增殖情況;FCM法檢測(cè)抑制LSD1活性或沉默LSD1基因表達(dá)對(duì)HO8910細(xì)胞周期及凋亡的影響;最后,采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)抑制LSD1活性或沉默LSD1基因表達(dá)對(duì)HO8910細(xì)胞中p21、Bax、Bcl-2和survivin蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:建立了穩(wěn)定沉默LSD1表達(dá)的卵巢癌HO8910細(xì)胞株;LSD1表達(dá)沉默后,H3K4me2蛋白的表達(dá)水平隨著Dox濃度的增加而上調(diào);干擾LSD1基因表達(dá)或抑制LSD1的活性,均能夠顯著抑制HO8910細(xì)胞的增殖,并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡(P值均0.05)。此外,LSD1活性的抑制或LSD1表達(dá)的下調(diào)均可使細(xì)胞周期阻滯在G_1期,并下調(diào)Bcl-2和survivin蛋白的表達(dá),以及上調(diào)p21和Bax蛋白的表達(dá)。結(jié)論 :沉默人卵巢癌細(xì)胞HO8910中LSD1基因的表達(dá)能有效抑制細(xì)胞的增殖,使細(xì)胞阻滯在G_1期,促進(jìn)細(xì)胞的凋亡,提示LSD1可能是卵巢癌治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。
[Abstract]:Aim: to study the effects of the down-regulation of lysine-specific demethylase 1 (LSD1) expression and the decrease of enzyme activity on the proliferation and apoptosis of human ovarian cancer HO8910 cells. Methods: lentivirus infection system was used to transfer lentivirus vector pLKO-Tet-On-LSD1-shRNAs with specific LSD1 gene into HO8910 cells. Purine mycin was used to screen HO8910 cell line HO8910-LSD1-shRNA, and HO8910-LSD1-shRNA cells were treated with doxycycline (doxycycline 1 10 and 100 ng/m L). The expression of LSD1 mRNA and protein and the dimethylated H3K4me2 protein at the fourth position of histone H3 were detected by real-time fluorescence quantitative PCR and Western blotting respectively. HO8910 cells and HO8910-LSD1-shRNA cells were treated with LSD1 and Dox, respectively. The proliferation of HO8910 and HO8910-LSD1-shRNA cells was detected by MTT and EdU staining. The effects of inhibiting LSD1 activity or silencing LSD1 gene expression on HO8910 cell cycle and apoptosis were detected by MTT and EdU staining. Finally, the effects of inhibition of LSD1 activity or silencing of LSD1 gene expression on the expression of Bcl-2 and survivin in HO8910 cells were detected by Western blot. Results: the expression level of H3K4me2 protein was up-regulated with the increase of Dox concentration in ovarian cancer HO8910 cell line (HO8910 cell line) with stable silencing of LSD1 expression, and the proliferation of HO8910 cells could be significantly inhibited by interfering with the expression of LSD1 gene or inhibiting the activity of LSD1. And the P value of promoting apoptosis was 0.05%. In addition, the inhibition of LSD1 activity or the down-regulation of LSD1 expression could block the cell cycle in G1 phase, down-regulate the expression of Bcl-2 and survivin, and up-regulate the expression of p21 and Bax. Conclusion: silencing the expression of LSD1 gene in human ovarian cancer cell line HO8910 can effectively inhibit the proliferation of human ovarian cancer cells, block the cells in Gs1 phase and promote cell apoptosis, suggesting that LSD1 may be a new target for the treatment of ovarian cancer.
【作者單位】： 江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院;江蘇大學(xué)職工醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81170573)~~
【分類號(hào)】：R737.31

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本文編號(hào)：1905025