本文選題：豬圓環(huán)病毒型 + Cap蛋白�。� 參考：《中國畜牧獸醫(yī)》2017年08期

【摘要】：為研制一種能有效控制豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)的新型疫苗,本試驗將PCV2的ORF2基因克隆至植物乳桿菌表達載體pSCPSP超強啟動子SCP的下游,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pSCPSP-Cap,用電擊轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化克隆至表達宿主菌植物乳桿菌,獲得一株重組植物乳桿菌。以SDS-PAGE和Western blotting法檢測24h上清液中表達的蛋白;將8周齡的SPF級BALB/c小鼠隨機分組,每組8只,分別設(shè)置對照組、空載體組、灌胃組、飲水組、滅活疫苗組,試驗14、28、42和56d后對小鼠采血,分離血清,利用PCV2ELISA抗體檢測試劑盒檢測小鼠血清中PCV2的抗體水平。SDS-PAGE、Western blotting結(jié)果顯示,PCV2衣殼蛋白在植物乳桿菌中成功分泌表達,表達的蛋白分子質(zhì)量為28ku,且具有良好的反應(yīng)原性,重組植物乳桿菌免疫小鼠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生PCV2特異性抗體顯著高于其他組(P0.05)。結(jié)果表明,PCV2的ORF2基因在植物乳桿菌中成功表達,且具有良好的生物活性,可為PCV2口服疫苗的開發(fā)研究提供理論參考。
[Abstract]:In order to develop a novel vaccine for the control of porcine circovirus type 2 PCV2 (porcine circovirus type 2), the ORF2 gene of PCV2 was cloned into the downstream of pSCPSP superpromoter SCP, an expression vector of Lactobacillus plantarum. The recombinant expression plasmid pSCPSP-Cap. was constructed and cloned into the host bacterium Lactobacillus plantarum by electroporation method, and a recombinant Lactobacillus plantarum strain was obtained. The expression of protein in the supernatant of 24 hours was detected by SDS-PAGE and Western blotting, and 8 weeks old SPF grade BALB/c mice were randomly divided into control group, empty carrier group, gastric perfusion group, drinking water group and inactivated vaccine group. Blood samples were collected from mice after 14 days and 56 days later. The antibody level of PCV2 in mouse serum was detected by PCV2ELISA antibody detection kit. The results of SDS-PAGEG Western blotting showed that capsid protein of PCV2 was secreted and expressed successfully in Lactobacillus plantarum. The molecular weight of the expressed protein was 28ku. and the protein had good reactivity. The PCV2 specific antibody produced by recombinant Lactobacillus plantarum immunized mice was significantly higher than that of other groups. The results showed that the ORF2 gene of PCV2 was successfully expressed in Lactobacillus plantarum and had good biological activity, which could provide a theoretical reference for the development and study of oral PCV2 vaccine.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院廣東省動物源性人畜共患病預(yù)防與控制重點實驗室國家生豬種業(yè)科學(xué)技術(shù)研究中心;宜春學(xué)院;
【基金】：廣東省省級科技計劃項目(2013B020202002)
【分類號】：S852.651

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本文編號：1898638