本文選題：家蠶 + 先天免疫��； 參考：《江蘇科技大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：肽聚糖識(shí)別蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)作為一個(gè)主要的模式識(shí)別受體,在家蠶Bombyx mori的天然免疫中具有重要的作用。本研究主要探討家蠶PGRP-L1基因的功能及其所參與的免疫信號(hào)通路。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增獲得家蠶PGRP-L1基因。利用微生物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)對(duì)5齡起蠶分別注射大腸桿菌Escherichia coli、釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae、枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis和PBS,12 h后取體壁和頭部提取RNA,然后采用RT-PCR和凝膠電泳技術(shù)測(cè)定BmPGRP-L1基因的表達(dá)水平;利用RNA干涉實(shí)驗(yàn)向5齡起蠶注射PGRP-L1dsRNA或PBS,6 h后再分別注射3種滅活的微生物或PBS,然后檢測(cè)家蠶體壁及頭部的免疫相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(Rel,Cactus和Relish)以及家蠶多個(gè)抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)基因(攻擊素、Moricin、葛佬素)的表達(dá)情況。本文從家蠶的組織中克隆了BmPGRP-L1基因,通過(guò)序列分析發(fā)現(xiàn)BmPGRP-L1與果蠅的DmPGRP-LC的相似度較高,而果蠅的DmPGRP-LC在被革蘭氏陰性菌感染后從而激活I(lǐng)md途徑,那么家蠶BmPGRP-L1是否參與Imd信號(hào)通路?微生物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)顯示注射大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)組比注射PBS的對(duì)照組BmPGRP-L1基因轉(zhuǎn)錄水平顯著上調(diào),而注射釀酒酵母和枯草芽孢桿菌的實(shí)驗(yàn)組BmPGRP-L1轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有變化;利用RNAi技術(shù)成功敲低BmPGRP-L1表達(dá)。對(duì)5齡敲低的家蠶注射滅活的微生物,敲低實(shí)驗(yàn)組relish因子表達(dá)低于正常對(duì)照組,相應(yīng)地抗菌肽表達(dá)也有不同程度的下調(diào)。微生物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示BmPGRP-L1基因參與家蠶對(duì)革蘭氏陰性菌大腸桿菌的免疫響應(yīng);RNAi實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示BmPGRP-L1基因在家蠶的體壁和頭中參與Imd信號(hào)通路。這些結(jié)果說(shuō)明BmPGRP-L1基因在家蠶的先天性免疫中扮演著重要的角色。
[Abstract]:Peptidoglycan recognition proteinsm (PGRPs), as a major pattern recognition receptor, plays an important role in the innate immunity of silkworm Bombyx mori. The purpose of this study was to investigate the function of PGRP-L1 gene and its immune signaling pathway in Bombyx mori (Bombyx mori). The PGRP-L1 gene of Bombyx mori was amplified by RT-PCR. E. coli Escherichia from 5th instar silkworm, Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae, Bacillus subtilis Bacillus subtilis and Bacillus subtilis were extracted from body wall and head of silkworm for 12 h, then the expression level of BmPGRP-L1 gene was determined by RT-PCR and gel electrophoresis. Three kinds of inactivated microbes or PBSs were injected into the 5th instar silkworm (Bombyx mori) from the 5th instar to PGRP-L1dsRNA or PBS5 for 6 h. Then the immune related transcription factors of silkworm body wall and head, Relishtus and several antimicrobial peptides of Bombyx mori (Bombyx mori) were detected. The expression of Moricin. BmPGRP-L1 gene was cloned from Bombyx mori tissues. Sequence analysis showed that the similarity between BmPGRP-L1 and Drosophila's DmPGRP-LC was high, while the DmPGRP-LC of Drosophila was activated Imd pathway after being infected by Gram-negative bacteria, so whether the BmPGRP-L1 of Bombyx mori participated in Imd signaling pathway? Microbial induction test showed that the BmPGRP-L1 gene transcription level of the experimental group injected with Escherichia coli was significantly up-regulated than that of the control group injected with PBS, but the BmPGRP-L1 transcription level of the experimental group injected with Saccharomyces cerevisiae and Bacillus subtilis did not change. RNAi technique was used to successfully knock down the expression of BmPGRP-L1. The expression of relish factor in the experiment group was lower than that in the control group, and the expression of antimicrobial peptide was down-regulated in different degree. The results of microbial induction experiment showed that BmPGRP-L1 gene was involved in the immune response of Bombyx mori to gram-negative bacteria Escherichia coli. The results showed that BmPGRP-L1 gene was involved in the Imd signaling pathway in the body wall and head of Bombyx mori. These results suggest that BmPGRP-L1 gene plays an important role in the innate immunity of Bombyx mori.
【學(xué)位授予單位】：江蘇科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S881.2

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本文編號(hào)：1895920