本文選題：家蠶MP基因 + 跨膜蛋白�。� 參考：《蠶業(yè)科學(xué)》2017年04期

【摘要】：從家蠶蛹c DNA文庫(kù)中篩選到一個(gè)403 bp的未知功能基因,將其命名為Bm MP54(Gen Bank登錄號(hào):DY231399.1)。該基因序列包含312 bp的開(kāi)放閱讀框,編碼由103個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì),生物信息學(xué)預(yù)測(cè)其含有2個(gè)跨膜區(qū)域,等電點(diǎn)及分子質(zhì)量分別為9.90和10.463 k D。將Bm MP54與家蠶核型多角體病毒(Bm NPV)的多角體蛋白基因(Polh)融合后分別連接到原核表達(dá)載體p GEX-4T-1和家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移載體p Fast BacTMHTB中構(gòu)建重組質(zhì)粒,并分別在大腸埃希菌BL21(DE3)和家蠶卵巢培養(yǎng)細(xì)胞(Bm N)中表達(dá)。原核表達(dá)的融合蛋白通過(guò)調(diào)節(jié)p H值、陰離子交換層析等純化獲得了65 k D的重組融合蛋白Polh-Bm MP54,通過(guò)Western blotting可在重組桿狀病毒感染的Bm N細(xì)胞中檢測(cè)到42 k D左右的Bm MP54重組蛋白,表明已按設(shè)計(jì)要求高效表達(dá)并純化獲得目的蛋白質(zhì)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析顯示Bm MP54在家蠶5齡幼蟲(chóng)的氣門和脂肪體組織中表達(dá)量最高,在表皮和頭部的表達(dá)量最低。上述研究結(jié)果有利于后續(xù)探討B(tài)m MP54在家蠶生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的生物學(xué)功能。
[Abstract]:A 403bp unknown functional gene was screened from the c DNA library of silkworm pupae and named Bm MP54(Gen Bank accession number: DY231399.1. The gene sequence contains an open reading frame of 312bp and encodes a protein composed of 103 amino acid residues. Bioinformatics predicts that it contains two transmembrane regions with isoelectric point and molecular weight of 9.90 and 10.463 KD, respectively. The recombinant plasmids were constructed by fusion of Bm MP54 with polyhedrosis protein gene of Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) into prokaryotic expression vector p GEX-4T-1 and Bombyx mori baculovirus expression system transfer vector p Fast BacTMHTB, respectively. It was also expressed in Escherichia coli BL21DE3 and silkworm ovary culture cells BmNs, respectively. The prokaryotic expression fusion protein regulates the pH value, 65 KD recombinant fusion protein Polh-Bm MP54 was purified by anion exchange chromatography. The recombinant protein Bm MP54 was detected by Western blotting in BmN cells infected with recombinant baculovirus. The results show that the target protein has been expressed and purified according to the design requirements. Real-time fluorescence quantitative PCR analysis showed that the expression of BM MP54 was the highest in the fifth instar larvae of Bombyx mori and the lowest in the epidermis and head. These results are helpful to further study the biological function of Bm MP54 during the growth and development of Bombyx mori (Bombyx mori).
【作者單位】： 浙江理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;浙江省家蠶生物反應(yīng)器和生物醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃“863”項(xiàng)目(No.2007AA021703) “十二五”國(guó)家科技重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)(No.2012ZX09102301-9)
【分類號(hào)】：S884.51

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