本文選題：家蠶MP基因 + 跨膜蛋白　； 參考：《蠶業(yè)科學》2017年04期

【摘要】：從家蠶蛹c DNA文庫中篩選到一個403 bp的未知功能基因,將其命名為Bm MP54(Gen Bank登錄號:DY231399.1)。該基因序列包含312 bp的開放閱讀框,編碼由103個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì),生物信息學預測其含有2個跨膜區(qū)域,等電點及分子質(zhì)量分別為9.90和10.463 k D。將Bm MP54與家蠶核型多角體病毒(Bm NPV)的多角體蛋白基因(Polh)融合后分別連接到原核表達載體p GEX-4T-1和家蠶桿狀病毒表達系統(tǒng)轉移載體p Fast BacTMHTB中構建重組質(zhì)粒,并分別在大腸埃希菌BL21(DE3)和家蠶卵巢培養(yǎng)細胞(Bm N)中表達。原核表達的融合蛋白通過調(diào)節(jié)p H值、陰離子交換層析等純化獲得了65 k D的重組融合蛋白Polh-Bm MP54,通過Western blotting可在重組桿狀病毒感染的Bm N細胞中檢測到42 k D左右的Bm MP54重組蛋白,表明已按設計要求高效表達并純化獲得目的蛋白質(zhì)。實時熒光定量PCR分析顯示Bm MP54在家蠶5齡幼蟲的氣門和脂肪體組織中表達量最高,在表皮和頭部的表達量最低。上述研究結果有利于后續(xù)探討B(tài)m MP54在家蠶生長發(fā)育過程中的生物學功能。
[Abstract]:A 403bp unknown functional gene was screened from the c DNA library of silkworm pupae and named Bm MP54(Gen Bank accession number: DY231399.1. The gene sequence contains an open reading frame of 312bp and encodes a protein composed of 103 amino acid residues. Bioinformatics predicts that it contains two transmembrane regions with isoelectric point and molecular weight of 9.90 and 10.463 KD, respectively. The recombinant plasmids were constructed by fusion of Bm MP54 with polyhedrosis protein gene of Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) into prokaryotic expression vector p GEX-4T-1 and Bombyx mori baculovirus expression system transfer vector p Fast BacTMHTB, respectively. It was also expressed in Escherichia coli BL21DE3 and silkworm ovary culture cells BmNs, respectively. The prokaryotic expression fusion protein regulates the pH value, 65 KD recombinant fusion protein Polh-Bm MP54 was purified by anion exchange chromatography. The recombinant protein Bm MP54 was detected by Western blotting in BmN cells infected with recombinant baculovirus. The results show that the target protein has been expressed and purified according to the design requirements. Real-time fluorescence quantitative PCR analysis showed that the expression of BM MP54 was the highest in the fifth instar larvae of Bombyx mori and the lowest in the epidermis and head. These results are helpful to further study the biological function of Bm MP54 during the growth and development of Bombyx mori (Bombyx mori).
【作者單位】： 浙江理工大學生命科學學院;浙江省家蠶生物反應器和生物醫(yī)藥重點實驗室;
【基金】：國家高技術研究發(fā)展計劃“863”項目(No.2007AA021703) “十二五”國家科技重大新藥創(chuàng)制專項(No.2012ZX09102301-9)
【分類號】：S884.51

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王立娟,鐘江;增強蛋白與多角體蛋白共包埋的研究[J];病毒學報;2003年01期

2 H.Mori;曹廣力;;利用桿狀病毒表達載體在昆蟲細胞中表達家蠶質(zhì)型多角體病毒的多角體蛋白,蛋白包裝成多角體[J];國外農(nóng)學(蠶業(yè));1994年03期

3 胡建新,丁紅珍,吳祥甫;蓖麻蠶核型多角體病毒多角體蛋白基因的克隆和核苷酸序列分析[J];遺傳學報;1993年04期

4 林同,張傳溪,安成才,王志英,劉寬余,苑華毅;舞毒蛾核型多角體病毒多角體蛋白基因的克隆、測序和表達(英文)[J];Entomologia Sinica;2002年04期

5 季平,沈衛(wèi)德,于繼彬,陳息林,何家祿;異源包裝家蠶核型多角體病毒的特性研究[J];蘇州絲綢工學院學報;2000年04期

6 邱國祥;黃自然;;柞蠶核型多角體病毒結構多肽的分析[J];廣東蠶業(yè);1992年02期

7 夏春勝,周性恒;褐刺娥質(zhì)型多角體病毒多角體蛋白含量與組成分析[J];浙江林學院學報;1993年02期

8 張軼嶺;孟祥坤;朱越雄;曹廣力;薛仁宇;貢成良;;BmCPV多角體蛋白對異源蛋白的包埋[J];蠶業(yè)科學;2011年04期

9 杜軍利;張傳溪;付建玉;陳正賢;肖強;;茶尺蠖核型多角體病毒多角體蛋白單克隆抗體的制備[J];生物工程學報;2012年01期

10 李亦平,忻紀厚,李載平;苜蓿尺蠖核多角體病毒(AcNPV)DNA的提純及多角體蛋白基因片段的克隆[J];遺傳學報;1990年04期

相關會議論文 前2條

1 張軼嶺;孟祥坤;潘中華;鄭小堅;曹廣力;薛仁宇;貢成良;;BmCPV多角體蛋白對異源蛋白的包埋[A];中國蠶學會商品性小蠶飼養(yǎng)規(guī)程和蠶病防控學術研討會論文集[C];2010年

2 劉挺;覃光星;;次氯酸鈣對家蠶病毒多角體蛋白作用初探[A];中國蠶學會第六屆青年學術研討會論文集（3）[C];2009年

相關博士學位論文 前1條

1 林同;舞毒蛾NPV多角體蛋白基因的克隆、測序和表達[D];東北林業(yè)大學;2001年

相關碩士學位論文 前10條

1 方騰飛;一個新的家蠶免疫相關蛋白基因與多角體蛋白基因的融合表達及其功能的初步研究[D];浙江理工大學;2011年

2 董現(xiàn)云;BmNPV多角體基質(zhì)蛋白成分解析及其組分蛋白，多角體蛋白和Bm134的研究[D];江蘇大學;2016年

3 吳敏;蓖麻蠶核型多角體病毒（Attacus ricini nuclear polyhedrosis virus）的研究[D];南京師范大學;2002年

4 孟祥坤;BmCPV-SZ全基因組序列測定與分析及其多角體蛋白包裝特性的研究[D];蘇州大學;2010年

5 賈蘊莉;肌動蛋白抑制桿狀病毒多角體蛋白基因的轉錄與表達[D];華中師范大學;2005年

6 趙丹丹;Ph-Hv1a融合蛋白表達載體的構建及其表達產(chǎn)物的殺蟲活性研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學;2007年

7 胡兆麗;斜紋夜蛾核型多角體病毒多角體蛋白基因與gp41基因分析及帶GFP標記的轉移載體的構建[D];蘇州大學;2005年

8 歐陽志荃;棉鈴蟲單核衣殼核多角體病毒（Helicoverpa armigera Single nucleocapsid nucleopolyhedrovirus HaSNPV）感染宿主的病理過程及cathepsin基因的研究[D];中國科學院研究生院(武漢病毒研究所);2003年

9 郜培杰;含增效蛋白重組棉鈴蟲病毒的構建及活性分析[D];中國科學院研究生院（武漢病毒研究所）;2007年

10 曲良建;昆蟲NPV垂直傳遞和PCR檢測的研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學;2004年

，

本文編號：1843687