本文選題：雞 + 等級(jí)前卵泡��； 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：產(chǎn)蛋性狀是雞的重要經(jīng)濟(jì)性狀之一,其產(chǎn)蛋性能的優(yōu)劣主要取決于雞卵巢組織等級(jí)卵泡的募集數(shù)量、優(yōu)勢(shì)選擇、等級(jí)化建立和卵泡成熟等,影響卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的因素有很多,其中除了受到下丘腦-垂體-性腺軸(HPG axis)所分泌的FSH、LH等激素的調(diào)節(jié)外,還受到轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族(TGF-β)和表皮生長(zhǎng)因子家族(EGF)等的調(diào)節(jié),此外還受到某些信號(hào)通路及其成員分子的影響。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究已證明,MST1、MST2、SAV1、LATS1、MOB2和YAP1是構(gòu)成雞Hippo/MST信號(hào)通路的核心成員,同時(shí)也證明雞Hippo/MST信號(hào)通路能夠抑制其等級(jí)前卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育。揭示Hippo/MST信號(hào)通路各主要成員在雞優(yōu)勢(shì)卵泡選擇和等級(jí)化建立過(guò)程的作用,為深入研究卵泡發(fā)育規(guī)律,解析促進(jìn)等級(jí)前優(yōu)勢(shì)卵泡選擇與等級(jí)化建立的調(diào)控原理提供理論依據(jù);也為深入發(fā)掘控制雞產(chǎn)蛋性狀的關(guān)鍵基因,開展以提高產(chǎn)蛋性狀和飼料轉(zhuǎn)化率為育種目標(biāo)的地方雞種資源遺傳改良和雜種優(yōu)勢(shì)利用奠定分子基礎(chǔ),具有十分重要的科學(xué)意義和應(yīng)用前景。然而,作為L(zhǎng)ATS1同源蛋白的LATS2在雞卵巢等級(jí)前卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控作用及其分子調(diào)控的研究目前尚未見(jiàn)到相關(guān)報(bào)道。本研究以150日齡海蘭褐蛋雞為實(shí)驗(yàn)材料,利用相對(duì)定量RT-PCR、熒光定量RT-PCR、基因過(guò)表達(dá)、siRNA干擾、Western blotting和EDU檢測(cè)等方法分別從mRNA轉(zhuǎn)錄水平和細(xì)胞水平深入探究LATS2基因表達(dá)變化對(duì)Hippo/MST信號(hào)通路其上游基因(MST1、MST2和SAV1)、其下游基因(YAP1、TEAD1和TEAD3)以及效應(yīng)器YAP1分子的潛在靶基因——等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞增殖生物標(biāo)記侯選基因(FSHR、STAR、CYP11A1、ESR1和ESR2)的mRNA表達(dá)的影響,進(jìn)而解析LATS2基因與它們之間的相互促抑調(diào)控關(guān)系及其對(duì)等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞增殖的生物學(xué)功能,從而揭示雞LATS2基因調(diào)控卵巢等級(jí)前卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的作用及其功能研究。主要實(shí)驗(yàn)與結(jié)果如下:1.LATS2及Hippo/MST信號(hào)通路上下游基因mRNA在卵泡中的表達(dá)特性本實(shí)驗(yàn)利用相對(duì)定量RT-PCR方法檢測(cè)150日齡海蘭褐蛋雞卵巢間質(zhì)和不同直徑卵泡中MST1、MST2、LATS2、YAP1、TEAD1和TEAD3基因mRNA的表達(dá)水平,然后進(jìn)行灰度值分析。結(jié)果顯示,MST1、MST2、LATS2、YAP1、TEAD1和TEAD3基因mRNA在卵巢間質(zhì)和不同直徑卵泡中均有表達(dá),并且其在等級(jí)前卵泡的整體mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于等級(jí)卵泡的整體mRNA相對(duì)表達(dá)量(P㩳0.05)。由此說(shuō)明MST1、MST2、LATS2、YAP1、TEAD1和TEAD3基因與雞卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān),但具體的調(diào)控機(jī)制還需要以下實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢驗(yàn)。2.過(guò)表達(dá)LAST2基因?qū)ippo/MST信號(hào)通路其上游基因(MST1、MST2和SAV1)、其下游基因(YAP1、TEAD1和TEAD3)以及等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞增殖生物標(biāo)記侯選基因(FSHR、STAR、CYP11A1、ESR1和ESR2)的mRNA表達(dá)的影響和對(duì)等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞增殖的調(diào)控作用本實(shí)驗(yàn)通過(guò)載體構(gòu)建與轉(zhuǎn)染、相對(duì)定量RT-PCR、熒光定量RT-PCR、Western blotting等方法以及EDU試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)LATS2基因后MST1、MST2、TEAD1和TEAD3基因的mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)(P㩳0.05),SAV1和YAP1基因的mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)(P㩳0.05);而生物標(biāo)記候選基因(FSHR、STAR、CYP11A1、ESR1和ESR2)mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)(P㩳0.05),同時(shí)EDU檢測(cè)雞等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞的增殖顯著減少(P㩳0.05)。說(shuō)明過(guò)表達(dá)LATS2基因?qū)ST1、MST2、TEAD1和TEAD3具有促進(jìn)作用,對(duì)SAV1和YAP1具有抑制作用,同時(shí)抑制雞等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞的增殖,進(jìn)而說(shuō)明LATS2基因?qū)﹄u等級(jí)前卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育具有調(diào)控作用,為了驗(yàn)證此結(jié)果的可信度,我們還需要進(jìn)行下一步驗(yàn)證。3.siRNA干擾LAST2基因?qū)ippo/MST信號(hào)通路其上游基因(MST1、MST2和SAV1)、其下游基因(YAP1、TEAD1和TEAD3)以及等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞增殖生物標(biāo)記侯選基因(FSHR、STAR、CYP11A1、ESR1和ESR2)的mRNA表達(dá)的影響和對(duì)等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞增殖的調(diào)控作用本實(shí)驗(yàn)通過(guò)將干擾片段siRNA-LATS2轉(zhuǎn)染至雞等級(jí)前顆粒細(xì)胞(4-8 mm)中,再利用相對(duì)定量RT-PCR、熒光定量RT-PCR、Western blotting以及EDU試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示siRNA干擾LATS2基因后MST1、MST2、TEAD1和TEAD3基因的mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)(P㩳0.05),SAV1和YAP1基因的mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)(P㩳0.05),而生物標(biāo)記候選基因(FSHR、STAR、CYP11A1、ESR1和ESR2)mRNA表達(dá)水平均顯著上調(diào)(P㩳0.05),同時(shí)雞等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞的增殖顯著(P㩳0.05),這與LATS2過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果恰好相反。siRNA干擾LATS2基因?qū)ST1、MST2、TEAD1和TEAD3具有抑制作用,對(duì)SAV1和YAP1具有促進(jìn)作用,同時(shí)促進(jìn)雞等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞的增殖。綜合實(shí)驗(yàn)2和實(shí)驗(yàn)3的結(jié)果表明LATS2基因?qū)ST1、MST2、TEAD1和TEAD3具有促進(jìn)作用,對(duì)SAV1和YAP1具有抑制作用,同時(shí)對(duì)雞等級(jí)前卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育具有抑制作用。4.ESR1和ESR2基因SNPs的檢測(cè)及其與產(chǎn)蛋性狀間的關(guān)聯(lián)分析因?yàn)镋SR1和ESR2在實(shí)驗(yàn)2和3中mRNA表達(dá)變化能夠影響雞等級(jí)前卵泡顆粒細(xì)胞的增殖與分化,同時(shí)大骨雞是優(yōu)良的蛋肉兼用型地方雞種,本實(shí)驗(yàn)為深入發(fā)掘控制雞產(chǎn)蛋性狀的關(guān)鍵基因,并以提高產(chǎn)蛋性狀和飼料轉(zhuǎn)化率為育種目標(biāo)的地方雞種資源遺傳改良和雜種優(yōu)勢(shì)利用奠定基礎(chǔ),故利用PCR-SSCP和DNA測(cè)序分析技術(shù)篩選ESR1和ESR2基因與大骨雞產(chǎn)蛋性狀相關(guān)聯(lián)的SNP位點(diǎn)。結(jié)果顯示,在ESR1基因外顯子4上發(fā)生T1101C的轉(zhuǎn)換,ESR2基因外顯子8上發(fā)生G1755A的轉(zhuǎn)換,其中ESR1和ESR2基因的TT和GG純合基因型個(gè)體在30、43、57、66周齡的產(chǎn)蛋量顯著高于CT和GA雜合基因型個(gè)體的產(chǎn)蛋量(P㩳0.05),而CT和GA雜合基因型個(gè)體在30周齡的蛋重顯著高于TT和GG純合基因型個(gè)體的蛋重(P㩳0.05)。根據(jù)兩個(gè)SNPs組合可以得到4種組合基因型,其中TTGG組合基因型個(gè)體在30、43、57、66周齡的產(chǎn)蛋量顯著高于TTGA、CTGG和CTGA組合基因型個(gè)體的產(chǎn)蛋量,CTGA組合基因型個(gè)體在30和43周齡的體重顯著高于TTGG組合基因型個(gè)體的體重,CTGA組合基因型個(gè)體在30和43周齡的蛋重顯著高于TTGG和TTGA組合基因型個(gè)體的蛋重。并且這兩個(gè)SNPs在大骨雞產(chǎn)蛋性狀中的遺傳方差百分比相對(duì)較高(P㧐1%)。本研究明確了MST1、MST2、LATS2、YAP1、TEAD1和TEAD3基因mRNA在卵巢間質(zhì)和不同直徑卵泡中均有表達(dá),并且各個(gè)基因mRNA的最高表達(dá)量均出現(xiàn)在等級(jí)前卵泡中,與等級(jí)卵泡的mRNA表達(dá)水平有顯著差異(P㩳0.05);揭示了LATS2基因?qū)ST1、MST2、TEAD1和TEAD3具有促進(jìn)作用,對(duì)SAV1和YAP1具有抑制作用;證明了LATS2基因能夠抑制海蘭褐蛋雞等級(jí)前卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育;同時(shí)明確了ESR1和ESR2的SNP位點(diǎn)T1101C和G1755A與大骨雞的產(chǎn)蛋性狀具有顯著關(guān)聯(lián)性(P㩳0.05)。本研究揭示了LATS2基因調(diào)控雞等級(jí)前卵泡生長(zhǎng)發(fā)育的作用,進(jìn)一步完善了雞卵泡發(fā)育的調(diào)控網(wǎng)絡(luò);同時(shí)為更深入地研究雞Hippo/MST信號(hào)通路調(diào)控等級(jí)前卵泡的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ),為雞卵泡優(yōu)勢(shì)選擇和等級(jí)化建立的遺傳機(jī)理提供理論依據(jù);也為開展以提高產(chǎn)蛋性狀和飼料轉(zhuǎn)化率為育種目的的地方雞種資源遺傳改良和雜種優(yōu)勢(shì)利用奠定分子基礎(chǔ),具有十分重要的科學(xué)意義和應(yīng)用前景。
[Abstract]:The effects of LATS2 gene expression on the growth and development of the chicken ' s Hippo / MST signal pathway were studied . The mRNA expression levels of MST1 , MST2 , LATS2 , YAP1 , TEAD1 and TEAD3 were significantly decreased ( P ? 0.05 ) . The results of experiments 2 and 3 showed that the mRNA expression levels of MST1 , MST2 , TEAD1 and TEAD3 decreased significantly ( P ? 0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S831

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