丹參SmIPI基因RNA干擾表達(dá)載體構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化
發(fā)布時間:2018-05-02 12:20
本文選題:丹參 + SmIPI; 參考:《生物技術(shù)》2017年04期
【摘要】:[目的]構(gòu)建丹參SmIPI1和SmIPI2基因的RNA干擾植株體系。[方法]利用Gateway技術(shù)分別構(gòu)建SmIPI1和SmIPI2的干擾表達(dá)載體p K7GWIWG2D(Ⅱ),并借助根癌農(nóng)桿菌EHA105菌株介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化,并通過抗性標(biāo)記篩選、Egfp熒光和qRT-PCR檢測陽性植株和轉(zhuǎn)化效果。[結(jié)果]表達(dá)克隆構(gòu)建后轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌液PCR檢測顯示陽性,遺傳轉(zhuǎn)化外植體并經(jīng)抗性培養(yǎng)基繼代篩選獲得的轉(zhuǎn)化植株根尖在熒光顯微鏡下呈強烈綠色熒光,且SmIPI1和SmIPI2基因的相對表達(dá)量下調(diào)幅度分別在64%~82%和23%~78%之間。[結(jié)論]成功構(gòu)建丹參SmIPI1和SmIPI2基因的RNA干擾表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化丹參植株,為探索SmIPI基因家族成員各自功能問題提供了研究材料基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to construct the RNA interference plant system of Salvia miltiorrhiza SmIPI1 and SmIPI2 genes. [methods] the interference expression vectors pK7GWIWG2D (鈪,
本文編號:1833895
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