發(fā)布時間：2018-05-01 09:32

  本文選題：亞抑菌濃度 + 抗生素��； 參考：《廣西師范大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：近年來,隨著抗生素使用量的增加,細(xì)菌的耐藥性逐漸增強(qiáng)、獲得耐藥性的速度逐漸加快,甚至出現(xiàn)了能夠耐受大多數(shù)抗生素的“超級細(xì)菌”。因此人們更多地關(guān)心抗生素的殺菌效率,但對亞抑菌濃度抗生素對細(xì)菌耐藥性傳播效率的影響少有關(guān)注。本文通過對野生黑頸長尾雉源大腸桿菌耐藥性、攜帶的可移動遺傳元件及幾種常用的抗生素在亞抑菌濃度條件下對耐藥基因傳播效率的影響進(jìn)行研究,了解野生狀態(tài)下大腸桿菌的耐藥性,并對該野生雉類的人工馴養(yǎng)回放保護(hù)性措施可能引起的耐藥性傳播風(fēng)險及亞抑菌濃度抗生素對耐藥基因水平傳播效率的影響的評價提供資料。采集廣西百色市田林縣野生黑頸長尾雉自然分布區(qū)野生黑頸長尾雉新鮮糞便,并利用顯色培養(yǎng)基分離篩選大腸桿菌；以蘋果酸脫氫酶基因(mdh)特異性引物對所分離大腸桿菌進(jìn)行鑒定,并對其16S rRNA進(jìn)行擴(kuò)增驗(yàn)證；對所分離的大腸桿菌腸桿菌基因間保守重復(fù)序列進(jìn)行PCR (ERIC-PCR)分析剔除重疊菌株；利用Kirby-Bauer法(K-B紙片法)對所獲得的不同ERIC指紋型大腸桿菌菌株的耐藥性進(jìn)行檢測；經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測所獲得的ERIC指紋型大腸桿菌菌株所攜帶的可移動遺傳元件；以原位雜交方法確定其中一株大腸桿菌的四環(huán)素耐藥基因類型及存在位置；通過在含有不同濃度抗生素的培養(yǎng)基中混合培養(yǎng)大腸桿菌和產(chǎn)酸克雷伯氏菌的方式檢測亞抑菌濃度抗生素對大腸桿菌耐藥基因傳播效率的影響。結(jié)果如下：(1)本研究利用大腸桿菌顯色培養(yǎng)基從5份糞便樣品中分離到100株大腸桿菌,mdh基因檢測并經(jīng)16S rRNA驗(yàn)證,排除其中2株非大腸桿菌�？梢娫擄@色培養(yǎng)基篩選大腸桿菌的準(zhǔn)確率可達(dá)98%。(2)對98株大腸桿菌進(jìn)行ERIC-PCR檢測,共獲得17個ERIC指紋型。當(dāng)聚類重新標(biāo)定距離為15時,可被分為4個類群。表明本研究中采集的野生黑頸長尾雉糞便內(nèi)大腸桿菌種群結(jié)構(gòu)較復(fù)雜。(3)藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示p內(nèi)酰胺類及四環(huán)素類抗生素對所分離大腸桿菌抑制效果較差,其中青霉素G對所分離大腸桿菌無抑制作用,頭孢曲松耐藥株占11.76%,所有菌株對四環(huán)素均不敏感；相反,喹諾酮類、脂肽類及氨基糖苷類抗生素具有很好的抑菌效果,喹諾酮類抗生素環(huán)丙沙星和氧氟沙星的抑菌率分別高達(dá)88.24%和76.47%,多粘菌素B的抑菌也達(dá)到82.35%。(4)17個ERIC指紋型大腸桿菌中耐受4種抗生素的菌株占35.30%(6/17),耐受3種的占29.40%(5/17),耐受2種及以下的僅占35.30%(6/17)。所有菌株均對至少一種抗生素具有抗性。若不考慮革蘭氏陰性菌對青霉素G天然耐受這一因素,則在所有耐藥菌株中,未出現(xiàn)可以同時耐受3類及以上抗生素的“超級細(xì)菌”。(5)17個ERIC指紋型大腸桿菌中均檢測到F質(zhì)粒遺傳標(biāo)記traA與整合子遺傳標(biāo)記intl,并檢出5種大小不同的1類整合子可變區(qū)但不含耐藥基因盒的片段；未檢出traF、 int Ⅱ、intⅢ及Int-Tn遺傳標(biāo)記。表明菌株攜帶的可移動遺傳元件種類雖然較單一,但仍然具有傳播與獲得耐藥基因的風(fēng)險。(6)15號大腸桿菌E15所含強(qiáng)力霉素耐藥基因?yàn)閠etB。該基因存在于質(zhì)粒上但其并非F質(zhì)粒,共培養(yǎng)時此基因可轉(zhuǎn)移至產(chǎn)酸克雷伯氏菌突變株TR-M30-1。在培養(yǎng)基中共培養(yǎng)時,傳播效率與硫酸卡那霉素和氨芐青霉素的亞抑菌濃度呈正相關(guān)(P0.05),與磺胺二甲基嘧啶、強(qiáng)力霉素及銅離子濃度無顯著性相關(guān)；在模擬自然條件中,傳播效率與上述藥品濃度間均無顯著相關(guān)性。
[Abstract]:In recent years, with the increase of the use of antibiotics, the drug resistance of bacteria has gradually increased, the speed of obtaining drug resistance is accelerating gradually, and even the "superbacteria" which can tolerate most antibiotics. Therefore, people are more concerned about the bactericidal efficiency of antibiotics, but the effect of antibiotics on the transmission efficiency of antimicrobial resistance to subbacteria concentration antibiotics In this paper, the effects of the resistance of the wild black necked Pheasant on Escherichia coli, the transportable genetic components and several commonly used antibiotics on the transmission efficiency of the resistant genes under the subinhibitory concentration were studied in order to understand the resistance of Escherichia coli in the wild state and to replay the artificial domestication of the wild pheasant. The effects of protective measures on the risk of transmission of drug resistance and the effect of subinhibitory concentration of antibiotics on the transmission efficiency of drug resistance genes were evaluated. The fresh feces of wild black necked Pheasant in the wild black necked Pheasant in Tianlin County, Baise, Guangxi, were collected and Escherichia coli was isolated and screened by coloring medium; The MDH specific primers were identified for the isolated Escherichia coli, and the 16S rRNA was amplified and verified. PCR (ERIC-PCR) analysis of the isolated sequence of isolated Escherichia coli gene was used to eliminate the overlapped strains, and the different ERIC fingerprints obtained by the Kirby-Bauer method (K-B paper method) were used. Detection of resistance to Enterobacteriaceae; detection of removable genetic elements carried by ERIC fingerprinted Escherichia coli strain by polymerase chain reaction (PCR); in situ hybridization method to determine the type and location of the tetracycline resistance gene of one of the Escherichia coli strains; through the cultivation of antibiotics in different concentrations The effects of the mixed culture of Escherichia coli and Klebsiella producing bacteria on the transmission efficiency of Escherichia coli resistance genes were detected. The results were as follows: (1) 100 strains of Escherichia coli were isolated from 5 fecal samples by coliform coliform medium, and the MDH gene was detected and verified by 16S rRNA. 2 strains of non Escherichia coli were found. The accuracy of screening Escherichia coli in the color culture medium could reach 98%. (2) and 98 strains of Escherichia coli were detected by ERIC-PCR. A total of 17 ERIC fingerprints were obtained. When the cluster re calibration distance was 15, it could be divided into 4 groups. The population structure of the feces of the wild black necked Pheasant was collected in this study. (3) the results of drug sensitivity test showed that the inhibitory effect of P lactam and tetracycline antibiotics on the isolated Escherichia coli was poor, of which penicillin G had no inhibitory effect on the isolated Escherichia coli, ceftriaxone resistant strains accounted for 11.76%, all strains were not sensitive to tetracycline; on the contrary, quinolones, lipopeptides and aminoglycoside antibiotics With good bacteriostasis, the bacteriostasis rates of ciprofloxacin and ofloxacin were 88.24% and 76.47% respectively. The Bacteriostasis of polymyxin B was 82.35%. (4) 17 ERIC fingerprinting Escherichia coli, 35.30% (6/17), 29.40% (5/17) tolerant and 35.30% (6), and 35.30% (6) tolerated. /17). All strains were resistant to at least one antibiotic. If the natural tolerance of Gram-negative bacteria to penicillin G was not considered, the "superbacteria" that could tolerate 3 or more antibiotics were not found in all resistant strains. (5) the F plasmid genetic marker traA was detected in 17 ERIC fingerprint Escherichia coli. Integron genetic markers Intl, and detection of 5 different 1 types of integron variable regions but not resistant gene boxes; traF, int II, int III and Int-Tn genetic markers were not detected. It showed that the types of mobile genetic elements carried by the strain still had the risk of spreading and obtaining resistance genes. (6) 15 E. coli. The gene of doxycycline resistance in E15 is tetB., which exists on plasmids but not F plasmids. In co culture, this gene can be transferred to Klebsiella producing mutant TR-M30-1. in culture medium. The transmission efficiency is positively correlated with the inhibitory concentration of kanamycin sulfate and ampicillin sulphate (P0.05), and sulfonamide two methyl azoxurin. There was no significant correlation between the concentration of pyridine, doxycycline and copper ion. There was no significant correlation between the transmission efficiency and the concentration of these drugs in simulated natural conditions.

【學(xué)位授予單位】：廣西師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R378

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