發(fā)布時(shí)間：2018-04-30 19:17

  本文選題：紅色熒光蛋白基因 + Tet-on系統(tǒng)��； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年08期

【摘要】：【目的】構(gòu)建四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)的表達(dá)載體,并對(duì)其功能進(jìn)行驗(yàn)證。【方法】利用pTRE-tight和pdsred-Express2-N1構(gòu)建帶有紅色熒光蛋白(red fluorescence protein,RFP)基因的載體pTRE-DSred,用其與另一載體pTet-on共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,并加入不同質(zhì)量濃度(0,0.1,1,10μg/mL)的強(qiáng)力霉素(doxycycline,DOX)誘導(dǎo),以未經(jīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞為對(duì)照組,在熒光顯微鏡下觀察RFP基因的表達(dá)情況。【結(jié)果】成功構(gòu)建了pTRE-DSred重組質(zhì)粒,將其與pTet-on質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,在細(xì)胞培養(yǎng)液中分別添加0.1,1,10μg/mL DOX,48h后均有紅色熒光蛋白的表達(dá),但10μg/mL DOX組紅色熒光蛋白的表達(dá)水平明顯低于前2個(gè)組;0μg/mL DOX誘導(dǎo)組中也有紅色熒光蛋白表達(dá),但水平極低;在未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒對(duì)照組中未觀察到紅色熒光蛋白的表達(dá)。RT-PCR結(jié)果顯示,pTREDsred和pTet-on共轉(zhuǎn)染組均檢測(cè)到RFP基因的轉(zhuǎn)錄�！窘Y(jié)論】成功構(gòu)建了Tet-on系統(tǒng)RFP基因表達(dá)載體,適宜質(zhì)量濃度的DOX誘導(dǎo)有助于目的基因的高水平表達(dá),但在不添加DOX誘導(dǎo)劑時(shí),該Tet-on系統(tǒng)存在目的基因低滲漏表達(dá)現(xiàn)象。
[Abstract]:[objective] to construct the expression vector of tetracycline inducible expression regulatory system and verify its function. [methods] using pTRE-tight and pdsred-Express2-N1 to construct the vector pTRE-DSredwith red fluorescent protein fluorescence pdsred-Express2-N1 gene and co-transfect 293T cells with another vector pTet-on. Doxycycline dox (doxycycline dox) was induced by 10 渭 g / mL doxycycline (doxycycline dox). The expression of RFP gene in 293T cells was observed under fluorescence microscope. [results] Recombinant pTRE-DSred plasmid was constructed successfully. It was co-transfected with pTet-on plasmid into 293T cells, and the red fluorescent protein was expressed in the cell culture medium after 48 hours after the addition of 0.1 ~ 10 渭 g/mL dox to the cell culture medium. However, the expression level of red fluorescent protein in 10 渭 g/mL DOX group was significantly lower than that in 0 渭 g/mL DOX induced group, but the level was very low. The expression of red fluorescent protein was not observed in the untransfected plasmid control group. RT-PCR results showed that both pTREDsred and pTet-on cotransfected group detected the transcription of RFP gene. [conclusion] the expression vector of RFP gene of Tet-on system was successfully constructed. The optimal concentration of DOX induces high level expression of the target gene, but the expression of the target gene is low in the Tet-on system without adding DOX inducer.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院廣東省農(nóng)業(yè)動(dòng)物基因組學(xué)與分子育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：國(guó)家“973”計(jì)劃專項(xiàng)(2011CB944202) 河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(51000788)
【分類號(hào)】：Q78

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本文編號(hào)：1825833