本文選題：紅色熒光蛋白基因 + Tet-on系統(tǒng)　； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)》2017年08期

【摘要】：【目的】構(gòu)建四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)的表達(dá)載體,并對其功能進(jìn)行驗證�！痉椒ā坷胮TRE-tight和pdsred-Express2-N1構(gòu)建帶有紅色熒光蛋白(red fluorescence protein,RFP)基因的載體pTRE-DSred,用其與另一載體pTet-on共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,并加入不同質(zhì)量濃度(0,0.1,1,10μg/mL)的強(qiáng)力霉素(doxycycline,DOX)誘導(dǎo),以未經(jīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞為對照組,在熒光顯微鏡下觀察RFP基因的表達(dá)情況。【結(jié)果】成功構(gòu)建了pTRE-DSred重組質(zhì)粒,將其與pTet-on質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,在細(xì)胞培養(yǎng)液中分別添加0.1,1,10μg/mL DOX,48h后均有紅色熒光蛋白的表達(dá),但10μg/mL DOX組紅色熒光蛋白的表達(dá)水平明顯低于前2個組;0μg/mL DOX誘導(dǎo)組中也有紅色熒光蛋白表達(dá),但水平極低;在未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒對照組中未觀察到紅色熒光蛋白的表達(dá)。RT-PCR結(jié)果顯示,pTREDsred和pTet-on共轉(zhuǎn)染組均檢測到RFP基因的轉(zhuǎn)錄�！窘Y(jié)論】成功構(gòu)建了Tet-on系統(tǒng)RFP基因表達(dá)載體,適宜質(zhì)量濃度的DOX誘導(dǎo)有助于目的基因的高水平表達(dá),但在不添加DOX誘導(dǎo)劑時,該Tet-on系統(tǒng)存在目的基因低滲漏表達(dá)現(xiàn)象。
[Abstract]:[objective] to construct the expression vector of tetracycline inducible expression regulatory system and verify its function. [methods] using pTRE-tight and pdsred-Express2-N1 to construct the vector pTRE-DSredwith red fluorescent protein fluorescence pdsred-Express2-N1 gene and co-transfect 293T cells with another vector pTet-on. Doxycycline dox (doxycycline dox) was induced by 10 渭 g / mL doxycycline (doxycycline dox). The expression of RFP gene in 293T cells was observed under fluorescence microscope. [results] Recombinant pTRE-DSred plasmid was constructed successfully. It was co-transfected with pTet-on plasmid into 293T cells, and the red fluorescent protein was expressed in the cell culture medium after 48 hours after the addition of 0.1 ~ 10 渭 g/mL dox to the cell culture medium. However, the expression level of red fluorescent protein in 10 渭 g/mL DOX group was significantly lower than that in 0 渭 g/mL DOX induced group, but the level was very low. The expression of red fluorescent protein was not observed in the untransfected plasmid control group. RT-PCR results showed that both pTREDsred and pTet-on cotransfected group detected the transcription of RFP gene. [conclusion] the expression vector of RFP gene of Tet-on system was successfully constructed. The optimal concentration of DOX induces high level expression of the target gene, but the expression of the target gene is low in the Tet-on system without adding DOX inducer.
【作者單位】： 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院廣東省農(nóng)業(yè)動物基因組學(xué)與分子育種重點實驗室;河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院動物科技學(xué)院;
【基金】：國家“973”計劃專項(2011CB944202) 河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院博士科研啟動基金項目(51000788)
【分類號】：Q78

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10 楊坤宇,劉如石,林鑒,張智洪,張軍,夏寧邵;紅色熒光蛋白在畢赤酵母中的高效表達(dá)[J];廈門大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2005年03期

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3 龍華;尾里;建二郎;若松佑子;松島良次;;紅色熒光蛋白(RFP)基因在轉(zhuǎn)基因青溕中的表達(dá)[A];中國青年農(nóng)業(yè)科學(xué)學(xué)術(shù)年報[C];2002年

4 賀偉峰;袁順宗;彭旭;譚江琳;馬兵;易紹萱;陳希煒;黃正根;程文廣;賈雄飛;王曉娟;甘成軍;胡曉紅;張小容;羅高興;吳軍;;人P311紅色熒光蛋白重組載體的構(gòu)建、表達(dá)與細(xì)胞內(nèi)定位研究[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

5 郭超;Alexander Endler;張敬;石紅軍;張軍;;含紅色熒光蛋白DsRed2的RNA干擾載體pDsRed2-SilencerU6構(gòu)建[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第九次會員代表大會暨青年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2007年

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5 龔小衛(wèi);p38 MAPK紅色熒光蛋白融合載體的構(gòu)建及表達(dá)[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2001年

6 徐金國;膽色素紅色熒光蛋白的分子定向進(jìn)化[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

7 高文英;細(xì)胞表面展示—釋放系統(tǒng)的構(gòu)建及應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2011年

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本文編號：1825833