本文選題：莫氏巴貝斯蟲 + trap基因　； 參考：《中國獸醫(yī)科學》2017年03期

【摘要】：本研究以莫氏巴貝斯蟲臨潭株為研究對象,分別從其基因組D N A和c DNA中成功擴增trap基因全長,應用生物信息學分析軟件分析驗證了該基因和蛋白的結構;構建p ET-30a-trap原核表達載體,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)p Lys S感受態(tài)細胞進行誘導表達;表達產(chǎn)物超聲破碎后,對上清和沉淀進行SDS-PAG E分析。純化可溶性的r Bm TRAP,W estern-blot分析其反應原性。結果顯示,莫氏巴貝斯蟲trap基因具有4個內(nèi)含子和5個外顯子,開放閱讀框大小為2 100 bp。第1~23位氨基酸為信號肽序列,第45~201和第238~302位分別為TRAP蛋白家族的v WA和TSP1結構域;重組蛋白r Bm TRAP以可溶性蛋白和包涵體兩種形式存在,莫氏巴貝斯蟲臨潭株、天祝株陽性血清可特異性識別r Bm TRAP,而與莫氏巴貝斯蟲寧縣株和河北株、羊巴貝斯蟲未定種新疆株和敦煌株、呂氏泰勒蟲和羊無漿體陽性血清無交叉反應。結果表明,r Bm TRAP具有作為血清學診斷方法候選抗原的潛力,為將來建立鑒別診斷莫氏巴貝斯蟲臨潭株、天祝株感染的免疫學診斷方法奠定了基礎。
[Abstract]:In this study, the whole length of trap gene was successfully amplified from the genomic DNAA and c DNA of Babes Mori Lintan strain, and the structure of the gene and protein was verified by bioinformatics analysis software. The prokaryotic expression vector of p ET-30a-trap was constructed and transformed into Escherichia coli BL21(DE3)p Lys S receptive cells to induce expression. After ultrasonic fragmentation, the supernatant and precipitate were analyzed by SDS-PAG E. The reactivity of soluble rBm TRAPP W estern-blot was analyzed. The results showed that the trap gene of Babes Mori had 4 introns and 5 exons, and the open reading frame size was 2 100 BP. The first 23 amino acid is the signal peptide sequence, the 45t201 and 238H302 are the v WA and TSP1 domains of the TRAP protein family, respectively, and the recombinant protein r Bm TRAP exists in the form of soluble protein and inclusion body, and the Lintan strain of Babes motif. The positive serum of Tianzhu strain could specifically recognize r Bm TRAP, but had no cross reaction with the strain of Babes Mohlich Chongning county and Hebei strain, Xinjiang strain and Dunhuang strain of sheep Babes parasite, and the positive serum of Taylor lui and sheep without serosa. The results showed that rBm TRAP had the potential as a candidate antigen for serological diagnosis, which laid a foundation for the future immunological diagnosis of the infection of Babes Mori strain Lintan strain and Tianzhu strain.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學國家重點實驗室甘肅省動物寄生蟲病重點實驗室;
【基金】：國家重點基礎研究發(fā)展計劃(973)項目(2015CB150300) 國家自然科學基金項目(31072130) 農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程項目(ASTIP) 甘肅省青年科技基金項目(145RJYA272)
【分類號】：S852.723

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本文編號：1813185