本文選題：豬傳染性胃腸炎病毒 + M蛋白��； 參考：《西南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)》2017年09期

【摘要】：篩選與豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)M蛋白相互作用的宿主蛋白,構(gòu)建M蛋白的誘餌載體pGBKT7-M.首先利用PCR技術(shù)從重組表達載體pFastBacTM-M中擴增得到M基因,定向克隆至載體pMD19-T simple,驗證正確后克隆至酵母雙雜交系統(tǒng)誘餌表達載體pGBKT7,經(jīng)雙酶切、PCR反應(yīng)及測序驗證其正確插入后,利用PEG/LiAc法將構(gòu)建好的重組誘餌載體pGBKT7-M及空載體pGBKT7分別轉(zhuǎn)化到酵母Y2HGold感受態(tài)細胞中,檢測其對酵母菌株是否有毒性作用和自激活活性及誘餌蛋白在酵母細胞內(nèi)的表達情況.結(jié)果表明:擴增得到M基因738bp,成功構(gòu)建了誘餌表達載體pGBKT7-M,此誘餌載體對酵母細胞無細胞毒性和自激活活性.Western blot檢測到5×104左右的蛋白條帶,顯示誘餌蛋白在酵母細胞內(nèi)穩(wěn)定表達.
[Abstract]:The host protein interacting with TGEV M protein of porcine infectious gastroenteritis virus was screened and the bait vector pGBKT7-M was constructed. M gene was amplified from the recombinant expression vector pFastBacTM-M by PCR technique and cloned into the vector pMD19-T simple. and then cloned into yeast two-hybrid system bait expression vector pGBKT7. After double enzyme digestion and sequencing, the M gene was cloned into the vector pGBKT7. The recombinant decoy vector pGBKT7-M and empty vector pGBKT7 were transformed into yeast Y2HGold receptive cells by PEG/LiAc method, and the toxicity, self-activation activity and the expression of bait protein in yeast cells were detected. The results showed that the bait expression vector pGBKT7-Mwas successfully constructed by amplification of the M gene 738bp. the decoy vector had no cytotoxicity and self-activating activity. The protein bands of about 5 脳 10 ~ 4 were detected by Western blot, which showed that the bait protein was stably expressed in yeast cells.
【作者單位】： 西南大學(xué)(榮昌校區(qū))動物醫(yī)學(xué)系;
【基金】：重慶市前沿與基礎(chǔ)研究項目(cstc2014jcyjA80015) 重慶市研究生科研創(chuàng)新項目(CYS14057,CYS2015076)
【分類號】：S852.651

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本文編號：1807834