本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用RNA沉默技術(shù)獲取抗黃瓜花葉病毒(CMV)和煙草花葉病毒(TMV)轉(zhuǎn)基因煙草，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

作物學(xué)報(bào) A T GR N MI A SN C 2 1,73:8_ 8 C A A O O C II A 0 13() 4 4 8 4 I S 0 9 - 4 0 CODE T HP S N 4 6 3 9; N S A9

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應(yīng)用 RN沉默技術(shù)獲取抗黃瓜花葉病毒( MV￥煙草花葉病毒 A C )f l ( MV轉(zhuǎn)基因煙草 T ) 牛顏冰王德富姚敏閆釗 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西太谷 0 0 0 38 1

由文鑫

摘要：R NA沉默是迄今最為有效的抗病毒策略，利用該策略不但能獲得免疫轉(zhuǎn)基因植株，且所得植株不易與其他病毒基因重組或異源包殼、生物安全性較高。將本實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的攜帶有煙草花葉病毒( MV)分移動(dòng)蛋白基因 T部 (MP和黃瓜花葉病毒( MV)分復(fù)制酶基因( R p反向重復(fù)結(jié)構(gòu)的植物表達(dá)載體 p I 3 — pi) A ) C部 A e) B N4 8MPRe( r,用農(nóng)桿菌/

浸潤(rùn)法轉(zhuǎn)化普通炯草品種 K 2,得 16株轉(zhuǎn)化植株，經(jīng)卡那霉素篩選和 P R檢測(cè)發(fā)現(xiàn) 18 36共 9 C 2株為陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株； P R S uh r R - C C .o ten和 TP R分析表明外源基因已整合到煙草基因組并在轉(zhuǎn)錄水平上得到表達(dá)： L S E IA結(jié)果顯示 2 .%的 03轉(zhuǎn)基因植株對(duì) C MV和 T MV復(fù)合侵染表現(xiàn)免疫性。本結(jié)果為利用 R NA沉默技術(shù)進(jìn)行植物抗多種病毒育種提供重要 數(shù)據(jù)，為防治其他多種病毒復(fù)合侵染提供借鑒。 關(guān)鍵詞： NA沉默：黃瓜花葉病毒；煙草花葉病毒；雙病毒抗性 R

T a s e i b c oPl n sRe it n oTwo vi u e i r n g n cTo a c a t ss a t t r s sv a RNA i n i g S l cn e NI Ya Bi g, ANG . U n. n W De Fu, YAO i YAN a a d YOU e Xi M n, Zh o, n W n— n Co e eo H g fLi c e c, h n i rc l r lUn v r i Ta g 3 8 1 Ch n f S i n e S a x i u t a i e s

t e Ag u y, i u 0 0 0, i a

Ab t a t RNA i n i g i h n me o f o l g u NA e r d t ni d c d b s NA, ih i le f c v tae y t sr c: s e c n s p e o n n o mo o o sR l a h d g a a o u e yd R i n whc a fe t esr t g s l i o o t i i sr ss n ln sS a . a s f h ssr tg, g e i—e u i b an v r e it t a t O f r By me i tae y h h r o s c r y i u a p n o t i b t mmu e t n g n cp a t wee o ti e, v i— n a s e i l s r ba n d a o d r n ig r c mb n n d t s a sd t g wi t e i s e e . n t i t d, er o i a t l n x r s i n v c o BI 3 P n o i i g a a c p i ai t oh r r n s I ss y t e mb n a t p e so e t r e n r n n h v u g h u h c n p e p N4 8 M -

Re (r e n s n te n et p a o T p i) o f f g h iv r dr e t f MV. MPa d MV. R pfs n r g n wa t some notb c oc l v r 3 6/ ii e e . A n C . e u i fa me t s a f r di o ac ut a K 2 A o r n t i v aAg o a t ru me i td. h a So a t r ee t d i h u t r d u wi 0 Ka On u d e n i r b c e i m. d a e T e tn f r ns we e s l e n t e c l e me i m t 1 0 mg L- r m c u h n. e h n r d a d

nn t-i r s e i l t r b an d n u d d a d t n—ih fwhc r o iv l t,a d te rss n et iey s ta g ncp a sweeo tie,o eh n r n we t eg to ih weep st e pa s n h eit c o x n n e y i n a C V d TM v S e td a ed g e fvr s P M n a Wa se t e r e o iu . CR. o t e b o n . CR

a y i o e t s e i ln e n仃ae t h t S uh m l t d RT P a n a l ss f a g n cp a t d mo s td t r h n s

t a e e o e o s DNA S n e r td i t h o a c e o c DNA d wa x r s e n ta s rp o a e e . ssa c l tt x g n u l h Wa i tg ae n o t e t b c o g n mi n a s e p s d i n c i t n lv 1 Re itn e e r i l a s y i d c t a b u 0 3 t s e i l t r s a i ae t t o t .% r n d h a 2 n a g n c p a s we ei n mmu et eC— f t n wi V n n t O i e i t TM oh nc o h a d CM V. 1i r s l wi r v d 1 1S e u t l p o i e l t r p ni o tn r f r n ef r l t t vr l r e i ga df rp e e t gt ev a O i f c o . o c o sa mp r t e c o p a a i ia b e d n n a e e n n— o rv ni h n r C n i i l— e t n Ke wo d: y r s RNA l n i g C c mb r s i i s T b c omo a cvr s Du— iu ss n e s e cn; u u e i mo acv r; o a c s i iu; a vr sr it c u l e a

黃瓜花葉病毒 ( MV和煙草花葉病毒( MV是 C ) T )世界范圍內(nèi)分布最廣、寄主最多、且極易傳播的兩

病毒的抗性[3 11這種方法獲得高抗轉(zhuǎn)基因植物的 -。但幾率較小，且該策略還存在異源重組等生態(tài)安全性問(wèn)題【。R A沉默是由雙鏈 R A(s N ) I的一 4 N】 N dR A￣發(fā) 種細(xì)胞內(nèi) mR A特異降解現(xiàn)象，即發(fā)生沉默的基因 N 轉(zhuǎn)錄仍然正常進(jìn)行，而合成的 mR A在細(xì)胞質(zhì)中發(fā) N生了序列特異性降解，導(dǎo)致基因不能正常表達(dá)成蛋

種植物病毒，它們單一或復(fù)合侵染均能引起農(nóng)作物 的嚴(yán)重病害，后者的危害更為嚴(yán)重。因此尋求一種快捷、有效的病毒復(fù)合侵染防治策略顯得尤為迫切

和重要。利用病毒基因轉(zhuǎn)化植物獲取抗病毒植株是 當(dāng)前防治病毒病害的重要途徑。已有研究將不同植

物病毒的衣殼蛋白(

P基因構(gòu)建到不同表達(dá)盒中，， C) 通過(guò)表達(dá)病毒衣殼蛋白而使轉(zhuǎn)基因植株產(chǎn)生對(duì)多種

白質(zhì)【。R A沉默技術(shù)的應(yīng)用，為我們提供了一條 5 N 1更為有效、安全的抗病毒新策略�？赏ㄟ^(guò)將同一 J病毒不同株系或不同病毒的有效核酸片段拼接，構(gòu)

本研究由國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(0 72 6和山西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(0 5 0 1資助。 3 5 1 1) 2 0 17 )

第一作者聯(lián)系方式：— i nu ig o@yh oc m. . e: 3 34 0 1 Emal inu o d ao .o c T l1 85 0 0 9: n R cie(稿日期 )2 1-73; cpe(受 E期 )2 1.12 . eevd收： 0 00 -0 Acetd接 t: 0 01—6

  本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用RNA沉默技術(shù)獲取抗黃瓜花葉病毒(CMV)和煙草花葉病毒(TMV)轉(zhuǎn)基因煙草，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。