版納微型豬近交系A(chǔ)SB17基因克隆及睪丸組織特異表達(dá)研究
本文選題:ANK(錨定蛋白重復(fù)) + SOCS(細(xì)胞因子信號(hào)抑制的蛋白) ; 參考:《河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)》2017年05期
【摘要】:ASB17基因與睪丸形成和精子發(fā)生密切相關(guān)。為研究ASB17基因在豬睪丸功能及精子發(fā)生過(guò)程中的作用,本研究從GenBank下載豬及近緣物種ASB17序列作為參考序列,設(shè)計(jì)特異引物從版納微型豬近交系(BMI)睪丸組織中擴(kuò)增ASB17基因完全編碼序列及部分側(cè)翼序列,對(duì)ASB17翻譯的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行多種功能生物信息學(xué)分析并構(gòu)建多物種系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),最后用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)BMI 15個(gè)重要組織的ASB17 mRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平。結(jié)果表明,擴(kuò)增得到BMI ASB17編碼區(qū)序列長(zhǎng)888bp,編碼295個(gè)氨基酸。功能生物信息學(xué)分析表明ASB17存在2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域ANK和SOCS_box,無(wú)跨膜螺旋結(jié)構(gòu),無(wú)N端信號(hào)肽序列,二級(jí)結(jié)構(gòu)以α螺旋為主,N末端和C末端均親水,有4類功能活性位點(diǎn),位于細(xì)胞質(zhì)的概率70.6%。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,ASB17基因在進(jìn)化中高度保守,且與牛、羊的親緣關(guān)系最近,符合物種的系統(tǒng)分類學(xué)。多組織相對(duì)熒光定量表達(dá)分析表明ASB17基因在睪丸中特異高表達(dá),在心、肝等其他14個(gè)組織中不表達(dá)。研究結(jié)果為探索BMI ASB17基因在睪丸形成和精子發(fā)生過(guò)程中的作用及功能奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:ASB17 gene is closely related to testicular formation and spermatogenesis.In order to study the role of ASB17 gene in testis function and spermatogenesis of pigs, we downloaded the ASB17 sequences of porcine and related species from GenBank as reference sequences.A specific primer was designed to amplify the complete coding sequence and partial flanking sequence of the ASB17 gene from the testis of BMI, a miniature pig inbred strain of Banna, and to analyze the protein sequence translated by ASB17 in a variety of functional bioinformatics and to construct a multispecies phylogenetic tree.Finally, ASB17 mRNA transcriptional expression in 15 important tissues of BMI was detected by real-time fluorescence quantitative PCR.The results showed that the sequence of BMI ASB17 coding region was 888bp, encoding 295 amino acids.Functional bioinformatics analysis showed that ASB17 had two conserved domains, ANK and SOCs, no transmembrane helical structure and no N-terminal signal peptide sequence. The secondary structure consisted of 偽 -helix and hydrophilic at both N-terminal and C-terminal, with four functional active sites.The probability of being located in the cytoplasm was 70.6.Phylogenetic analysis showed that the ASB17 gene was highly conserved in evolution and had the closest phylogenetic relationship with cattle and sheep, which was consistent with the phylogeny of the species.Quantitative analysis of multitissue relative fluorescence showed that ASB17 gene was specifically overexpressed in testis, but not expressed in 14 other tissues, such as heart, liver and so on.The results laid a foundation for exploring the role and function of BMI ASB17 gene in testicular formation and spermatogenesis.
【作者單位】: 云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院;云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所;云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省版納微型豬近交系重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】:云南省教育廳科學(xué)研究基金項(xiàng)目(2017ZZX099) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31660637;31460580;31660650)
【分類號(hào)】:S828.2
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本文編號(hào):1770711
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