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版納微型豬近交系A(chǔ)SB17基因克隆及睪丸組織特異表達研究

發(fā)布時間:2018-04-19 00:12

  本文選題:ANK(錨定蛋白重復(fù)) + SOCS(細胞因子信號抑制的蛋白); 參考:《河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報》2017年05期


【摘要】:ASB17基因與睪丸形成和精子發(fā)生密切相關(guān)。為研究ASB17基因在豬睪丸功能及精子發(fā)生過程中的作用,本研究從GenBank下載豬及近緣物種ASB17序列作為參考序列,設(shè)計特異引物從版納微型豬近交系(BMI)睪丸組織中擴增ASB17基因完全編碼序列及部分側(cè)翼序列,對ASB17翻譯的蛋白質(zhì)序列進行多種功能生物信息學(xué)分析并構(gòu)建多物種系統(tǒng)進化樹,最后用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測BMI 15個重要組織的ASB17 mRNA轉(zhuǎn)錄表達水平。結(jié)果表明,擴增得到BMI ASB17編碼區(qū)序列長888bp,編碼295個氨基酸。功能生物信息學(xué)分析表明ASB17存在2個保守結(jié)構(gòu)域ANK和SOCS_box,無跨膜螺旋結(jié)構(gòu),無N端信號肽序列,二級結(jié)構(gòu)以α螺旋為主,N末端和C末端均親水,有4類功能活性位點,位于細胞質(zhì)的概率70.6%。系統(tǒng)進化分析表明,ASB17基因在進化中高度保守,且與牛、羊的親緣關(guān)系最近,符合物種的系統(tǒng)分類學(xué)。多組織相對熒光定量表達分析表明ASB17基因在睪丸中特異高表達,在心、肝等其他14個組織中不表達。研究結(jié)果為探索BMI ASB17基因在睪丸形成和精子發(fā)生過程中的作用及功能奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:ASB17 gene is closely related to testicular formation and spermatogenesis.In order to study the role of ASB17 gene in testis function and spermatogenesis of pigs, we downloaded the ASB17 sequences of porcine and related species from GenBank as reference sequences.A specific primer was designed to amplify the complete coding sequence and partial flanking sequence of the ASB17 gene from the testis of BMI, a miniature pig inbred strain of Banna, and to analyze the protein sequence translated by ASB17 in a variety of functional bioinformatics and to construct a multispecies phylogenetic tree.Finally, ASB17 mRNA transcriptional expression in 15 important tissues of BMI was detected by real-time fluorescence quantitative PCR.The results showed that the sequence of BMI ASB17 coding region was 888bp, encoding 295 amino acids.Functional bioinformatics analysis showed that ASB17 had two conserved domains, ANK and SOCs, no transmembrane helical structure and no N-terminal signal peptide sequence. The secondary structure consisted of 偽 -helix and hydrophilic at both N-terminal and C-terminal, with four functional active sites.The probability of being located in the cytoplasm was 70.6.Phylogenetic analysis showed that the ASB17 gene was highly conserved in evolution and had the closest phylogenetic relationship with cattle and sheep, which was consistent with the phylogeny of the species.Quantitative analysis of multitissue relative fluorescence showed that ASB17 gene was specifically overexpressed in testis, but not expressed in 14 other tissues, such as heart, liver and so on.The results laid a foundation for exploring the role and function of BMI ASB17 gene in testicular formation and spermatogenesis.
【作者單位】: 云南農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院;云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所;云南農(nóng)業(yè)大學(xué)云南省版納微型豬近交系重點實驗室;云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【基金】:云南省教育廳科學(xué)研究基金項目(2017ZZX099) 國家自然科學(xué)基金項目(31660637;31460580;31660650)
【分類號】:S828.2

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本文編號:1770711

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