本文選題：ctfatp基因 + 熱帶假絲酵母��； 參考：《中國釀造》2017年03期

【摘要】：以熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)1798中的ctfat1p基因?yàn)檠芯繉ο?利用重疊PCR將ctfat1p基因內(nèi)約500 bp片段與G418抗性基因(kan~r)相連接,經(jīng)末端單酶切后電轉(zhuǎn)化至C.tropicalis 1798感受態(tài)細(xì)胞中,通過一次同源單交換,將抗性基因kan~r插入至ctfat1p基因內(nèi)部,實(shí)現(xiàn)目的基因的敲除,并通過發(fā)酵實(shí)驗(yàn)分析Ctfat1p在熱帶假絲酵母脂肪酸跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)過程中的功能。結(jié)果表明,經(jīng)過G418抗性篩選和基因組PCR鑒定,成功獲得ctfat1p基因缺失菌株C.tropicalis 1798△ctfat1p;分析發(fā)現(xiàn)ctfat1p基因敲除對C.tropicalis 1798以油脂為底物培養(yǎng)12h后重組菌OD_(600nm)值僅為野生型菌株的47.9%,表明ctfat1p基因敲除后影響C.tropicalis 1798對油脂吸收利用。通過基因敲除手段構(gòu)建ctfat1p基因缺失菌株,可以減弱細(xì)胞對長鏈脂肪酸的攝取,驗(yàn)證了ctfat1p基因?yàn)闊釒Ъ俳z酵母油脂吸收和利用的關(guān)鍵基因。
[Abstract]:The ctfat1p gene in Candida tropicalis)1798 of Candida tropicalis was used as the study object. About 500bp fragment of ctfat1p gene was linked with G418 resistance gene by overlapping PCR. The gene was electrotransformed into C.tropicalis 1798 receptive cells by endonuclease digestion.The resistance gene kan~r was inserted into the ctfat1p gene to realize the knockout of the target gene and the function of Ctfat1p in the transmembrane transport of fatty acids from Candida tropicalis was analyzed by fermentation experiments.The results showed that, after G418 resistance screening and genomic PCR identification,Ctfat1p gene deletion strain C.tropicalis 1798 ctfat1 pwas successfully obtained, and it was found that ctfat1p gene knockout was only 47.9% of that of wild-type strain, which indicated that ctfat1p gene knockout affected C.tropicalis 1798 oil absorption and utilization of C.tropicalis 1798.Construction of ctfat1p gene deletion strain by gene knockout method can reduce the uptake of long chain fatty acids in cells and verify the key gene of ctfat1p gene because of the absorption and utilization of Candida tropicalis oil.
【作者單位】： 齊魯工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院山東省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：山東省自主創(chuàng)新及成果轉(zhuǎn)化專項(xiàng)(No.201422CX02602)
【分類號】：Q93;Q78

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本文編號：1770059