發(fā)布時(shí)間：2018-04-18 13:07

  本文選題：乳腺癌 + 死亡相關(guān)蛋白激酶　； 參考：《福建師范大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：乳腺癌是女性中常見的癌癥,是造成婦女死亡率最高的癌癥。DNA甲基化可以通過調(diào)節(jié)基因的表達(dá)影響細(xì)胞免疫、胚胎發(fā)育及腫瘤發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn),死亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)參與細(xì)胞凋亡、遷移、自噬等生物學(xué)功能。DAPK啟動(dòng)子區(qū)域甲基化可使其表達(dá)沉默,與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究試圖評(píng)估DAPK在乳腺癌中的mRNA表達(dá)以及DAPK啟動(dòng)子甲基化情況,為未來乳腺癌的早期診斷及藥物治療提供方向。本研究分別在3種乳腺細(xì)胞系(MCF10A,正常乳腺細(xì)胞系;MCF7, ER陽性乳腺癌細(xì)胞系;MDA-MB-231,三陰性乳腺癌細(xì)胞系)和32位病人的新鮮癌組織與相應(yīng)癌旁組織中利用Real-time PCR檢測(cè)DAPK的表達(dá)。結(jié)果顯示,DAPK的mRNA在MCF10A中相對(duì)于MCF7和MDA-MB-231表達(dá)較高。在乳腺癌患者中,不管是在癌組織還是相應(yīng)的癌旁組織中,DAPK均有表達(dá),但在18位病人癌組織中DAPK表達(dá)較低,約占56%。進(jìn)一步結(jié)合DAPK的mRNA表達(dá)與臨床病理數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)DAPK的表達(dá)與HER2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P0.01)。同時(shí),通過MSP檢測(cè)DAPK啟動(dòng)子甲基化,發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞系MCF10A、MDA-MB-231中DAPK均未受到甲基化作用,而在MCF7中DAPK基因部分被甲基化,部分未被甲基化。在病人的癌組織中,DAPK甲基化約占62.5%,癌旁組織中占75%；癌組織中未被甲基化大概占93.6%,癌旁組織中未被甲基化的樣本約占87.5%。設(shè)計(jì)合成檢測(cè)位點(diǎn)甲基化和非甲基化序列并克隆到特定的質(zhì)粒中作為標(biāo)準(zhǔn)品,運(yùn)用qMSP進(jìn)一步絕對(duì)定量檢測(cè)樣本中DAPK啟動(dòng)子甲基化,結(jié)果顯示,在癌組織中DAPK啟動(dòng)子甲基化普遍偏高,且相對(duì)癌旁組織高出近2-10倍。在乳腺細(xì)胞系及病人樣本中針對(duì)DAPK啟動(dòng)子設(shè)計(jì)的特異性甲基化檢測(cè)引物,其檢測(cè)區(qū)域?yàn)?-1197--1092),共計(jì)106bp,包含CpG島上六個(gè)具體的甲基化位點(diǎn)。據(jù)在線軟件推測(cè)分析,在DAPK翻譯起始位點(diǎn)上游近2400bp中,共含有2個(gè)可能的CpG島,故本實(shí)驗(yàn)共克隆了DAPK翻譯起始位點(diǎn)上游2570bp的序列長度,將其克隆到去除CMV啟動(dòng)子的pEGFP-N1質(zhì)粒中,該質(zhì)粒命名為pDp-EGFP。pDp-EGFP質(zhì)粒的功能在HeLa細(xì)胞得到成功驗(yàn)證。pDp-EGFP質(zhì)粒的構(gòu)建將為進(jìn)一步探索DAPK啟動(dòng)子中其他具體甲基化位點(diǎn)及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The expression of DAPK in breast cancer and the methylation of DAPK were detected by means of methylation of DAPK promoter .
The methylation of DAPK promoter in cancer tissue was detected by using qMSP as standard . The results showed that the methylation of DAPK promoter in cancer tissue was almost 2 - 10 times higher than that in adjacent tissues . The results showed that the promoter methylation of DAPK promoter was nearly 2 - 10 times higher than that of adjacent tissues .

【學(xué)位授予單位】：福建師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

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