發(fā)布時間：2018-04-18 13:07

  本文選題：乳腺癌 + 死亡相關(guān)蛋白激酶��； 參考：《福建師范大學》2016年碩士論文

【摘要】：乳腺癌是女性中常見的癌癥,是造成婦女死亡率最高的癌癥。DNA甲基化可以通過調(diào)節(jié)基因的表達影響細胞免疫、胚胎發(fā)育及腫瘤發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn),死亡相關(guān)蛋白激酶(DAPK)參與細胞凋亡、遷移、自噬等生物學功能。DAPK啟動子區(qū)域甲基化可使其表達沉默,與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究試圖評估DAPK在乳腺癌中的mRNA表達以及DAPK啟動子甲基化情況,為未來乳腺癌的早期診斷及藥物治療提供方向。本研究分別在3種乳腺細胞系(MCF10A,正常乳腺細胞系;MCF7, ER陽性乳腺癌細胞系;MDA-MB-231,三陰性乳腺癌細胞系)和32位病人的新鮮癌組織與相應癌旁組織中利用Real-time PCR檢測DAPK的表達。結(jié)果顯示,DAPK的mRNA在MCF10A中相對于MCF7和MDA-MB-231表達較高。在乳腺癌患者中,不管是在癌組織還是相應的癌旁組織中,DAPK均有表達,但在18位病人癌組織中DAPK表達較低,約占56%。進一步結(jié)合DAPK的mRNA表達與臨床病理數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)DAPK的表達與HER2表達呈負相關(guān)(P0.01)。同時,通過MSP檢測DAPK啟動子甲基化,發(fā)現(xiàn)在細胞系MCF10A、MDA-MB-231中DAPK均未受到甲基化作用,而在MCF7中DAPK基因部分被甲基化,部分未被甲基化。在病人的癌組織中,DAPK甲基化約占62.5%,癌旁組織中占75%；癌組織中未被甲基化大概占93.6%,癌旁組織中未被甲基化的樣本約占87.5%。設(shè)計合成檢測位點甲基化和非甲基化序列并克隆到特定的質(zhì)粒中作為標準品,運用qMSP進一步絕對定量檢測樣本中DAPK啟動子甲基化,結(jié)果顯示,在癌組織中DAPK啟動子甲基化普遍偏高,且相對癌旁組織高出近2-10倍。在乳腺細胞系及病人樣本中針對DAPK啟動子設(shè)計的特異性甲基化檢測引物,其檢測區(qū)域為(-1197--1092),共計106bp,包含CpG島上六個具體的甲基化位點。據(jù)在線軟件推測分析,在DAPK翻譯起始位點上游近2400bp中,共含有2個可能的CpG島,故本實驗共克隆了DAPK翻譯起始位點上游2570bp的序列長度,將其克隆到去除CMV啟動子的pEGFP-N1質(zhì)粒中,該質(zhì)粒命名為pDp-EGFP。pDp-EGFP質(zhì)粒的功能在HeLa細胞得到成功驗證。pDp-EGFP質(zhì)粒的構(gòu)建將為進一步探索DAPK啟動子中其他具體甲基化位點及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The expression of DAPK in breast cancer and the methylation of DAPK were detected by means of methylation of DAPK promoter .
The methylation of DAPK promoter in cancer tissue was detected by using qMSP as standard . The results showed that the methylation of DAPK promoter in cancer tissue was almost 2 - 10 times higher than that in adjacent tissues . The results showed that the promoter methylation of DAPK promoter was nearly 2 - 10 times higher than that of adjacent tissues .

【學位授予單位】：福建師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

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