本文選題：骨質疏松癥 + 鐵代謝　； 參考：《河北醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:觀察鐵調節(jié)蛋白2(Iron Regulatory Protein 2,Irp2)基因敲除小鼠體內鐵代謝和骨代謝的改變,探討鐵代謝紊亂在老年小鼠骨質疏松癥發(fā)病中的作用及其機制。方法:本課題擬利用15月齡鐵調節(jié)蛋白2基因敲除C57BL/6雌性小鼠(Irp2~(-/-) ,內源性鐵過載模型)為研究對象,另外選擇6只同月齡健康雌性野生型(Irp2~(+/+))小鼠作為對照組。取小鼠第6腰椎行Micro CT并三維重建;對第6腰椎進行骨組織切片,并行普魯士藍鐵染色及HE染色,觀察骨組織鐵沉積情況和骨組織的結構變化;采用原子吸收光譜法檢測小鼠第6腰椎骨鐵、骨鈣、骨磷以及小鼠肝鐵含量;Realtime PCR法檢測骨組織中鐵代謝相關基因[膜鐵轉運蛋白1(Ferroportin-1,Fpn1)、轉鐵蛋白受體1(Transferrin receptor-1,Tfr1)、鐵蛋白輕鏈(Ferritin light chain,Ftl)、鐵調素(Hepcidin)],及骨代謝相關基因[骨組織中堿性磷酸酶(Bone alkaline phosphatase,Balp)、骨鈣素(Bone Gla Protein,Bglap)、Ⅰ型膠原α1鏈(TypeⅠcollagen alpha 1 chain,ColⅠα1)、組織蛋白酶K(Cathepsin K,Ctsk)、活化T細胞核因子(Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,Nfatc1)、核因子κB受體活化因子(Receptor activator of nuclear factorκB,Rank)、抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphonatase,Trap)]的表達情況;Western-blot方法檢測骨組織中鐵代謝相關蛋白的表達水平;比色法檢測血清鐵,微板法檢測血清鈣水平,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中反映成骨細胞活性(Balp、Bglap、COLⅠα1)和破骨細胞活性[Ctsk、Trap、Ⅰ型膠原末端片段(C-terminal telopeptide of typeⅠcollagen,CTX-1)]的指標,同法檢測血清25羥維生素D3[25(OH)D3]水平和肝組織內維生素D 25-羥化酶(CYP2R1)的活性。結果:1 Micro CT結果顯示,與野生型小鼠相比,Irp2~(-/-) 組小鼠骨密度更低,骨小梁稀疏、數量更少,骨小梁的連續(xù)性下降、空隙增加,可見多處骨小梁斷裂,骨組織結構破壞明顯。三維重建相關參數分析顯示,和野生型小鼠相比,Irp2~(-/-) 組小鼠第6腰椎骨密度(BMD)和骨小梁數量(Tb.N)顯著降低(P分別0.05和0.01);2骨組織切片普魯士藍鐵染色顯示:與Irp2~(+/+)組小鼠相比,Irp2~(-/-) 組小鼠骨鐵沉積明顯降低;HE染色示:兩組小鼠均表現為骨質疏松,Irp2~(-/-) 組小鼠骨小梁更加稀松、薄弱、易斷裂,骨質明顯下降,骨質疏松癥更為嚴重;3原子吸收光譜法結果示:Irp2~(-/-) 組小鼠肝鐵含量明顯高于野生組(P0.001),骨鐵、骨鈣和骨磷含量顯著低于野生組小鼠(P0.01或P0.05);4鐵代謝相關基因的表達情況:與Irp2~(+/+)組相比,Irp2~(-/-) 組小鼠骨組織中Fpn1和Tfr1基因表達水平明顯下降(P0.05),Ftl、Hepcidin基因表達水平顯著升高(P均0.05);5骨代謝相關基因的表達情況:Irp2~(-/-) 組小鼠骨組織Balp、Bglap、ColⅠα1等成骨相關基因的表達水平較Irp2~(+/+)組明顯下降(均P0.05);Ctsk、Nfatc1、Rank、Trap等破骨相關基因的表達水平顯著升高(P0.05或P0.001);6鐵代謝相關蛋白的表達情況:Irp2~(-/-) 組小鼠骨組織中鐵蛋白重鏈(Ferritin heavy chain,FTH)、FTL、FPN1和鐵調節(jié)蛋白1(Iron Regulatory Protein 1,IRP1)表達水平較野生組小鼠顯著降低,Tf R1和二價金屬離子轉運體(Divalent Metal Transporter 1 without iron-responsive elements,DMT1-IRE)蛋白表達水平較Irp2~(+/+)組小鼠明顯升高(P分別0.05和0.01);7與Irp2~(+/+)組小鼠相比,Irp2~(-/-) 組小鼠血清鐵水平(64.71±5.21μmol/L vs 154.01±65.09μmol/L,P0.01),以及血清Balp(132.93±4.82μmol/L vs166.66±18.83μmol/L,P0.01)、Bglap(1.84±0.17μmol/L vs 2.86±0.19μmol/L,P0.001)和COLⅠα1(20.21±0.91 ng/ml vs 24.98±2.04 ng/ml,P0.001)等反映成骨細胞活性的指標顯著降低,血清Ctsk(72.42±1.82μmol/L vs 62.73±7.00μmol/L,P0.05)、Trap(40.63±2.43 U/L vs 36.42±2.77U/L,P0.05)和CTX-1(2.74±0.33μmol/L vs 2.19±0.42μmol/L,P0.05)等反映破骨細胞活性的指標明顯升高。與Irp2~(+/+)組小鼠相比,Irp2~(-/-) 組小鼠肝臟25-羥化酶(CYP2R1)(1.21±0.18 ng/mg vs 1.94±0.14 ng/mg,P0.001)活性和血清25羥維生素D3[25(OH)D3](25.63±0.98μmol/L vs28.40±1.66μmol/L,P0.01)水平顯著降低。兩組間血鈣水平無明顯差異。結論:1 Irp2基因敲除可導致小鼠體內鐵代謝紊亂及鐵分布異常(肝鐵沉積嚴重,骨鐵含量減少),小鼠骨組織內鐵代謝相關基因及其蛋白的表達也發(fā)生了明顯變化,以代償Irp2~(-/-) 小鼠體內的鐵代謝紊亂。2兩組小鼠均發(fā)生骨質疏松,Irp2~(-/-) 小鼠骨質疏松程度更加嚴重。3鐵代謝紊亂可加重骨質疏松癥的發(fā)展。內源性鐵過載引起的肝臟CYP2R1活性降低,以及后者引起的25(OH)D3水平降低,可能是Irp2~(-/-) 小鼠發(fā)生骨質疏松的重要原因之一。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R580

【參考文獻】

相關期刊論文 前6條

1 劉祿林;高超;王嘯;趙國陽;俞晨;沈光思;張鵬;王愛東;XI Huang;徐又佳;;鐵過載對去勢大鼠骨代謝的影響[J];中華骨質疏松和骨礦鹽疾病雜志;2013年04期

2 徐又佳;林華;;重視鐵代謝在骨質疏松癥診治中的意義[J];中華醫(yī)學雜志;2011年31期

3 馮玉爽;徐又佳;馬勇;艾紅珍;周海斌;徐煒;謝宗剛;董啟榕;;高齡女性骨質疏松性骨折與血清鐵過載的關系[J];江蘇醫(yī)藥;2011年08期

4 賈鵬;張增利;徐又佳;林華;;鐵超載對小鼠單核細胞RAW264.7向破骨細胞分化的影響[J];中華骨質疏松和骨礦鹽疾病雜志;2011年01期

5 趙理平;徐又佳;林華;張偉;馬勇;都本才;王昌超;張鵬;;高鐵環(huán)境對成骨細胞生物活性的影響[J];中華骨質疏松和骨礦鹽疾病雜志;2010年04期

6 徐又佳,錢忠明,俞晨;鐵調素(Hepcidin)在骨質礦化中的作用[J];中國骨質疏松雜志;2005年04期

，

本文編號：1740422