本文選題：敲除 + ATG　； 參考：《中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年11期

【摘要】：酵母ATG6蛋白是磷脂�；�-3激酶(PI3K)復(fù)合物Ⅰ的組成成分,在自噬起始階段促進(jìn)自噬小體的形成。為研究弓形蟲ATG6同源蛋白(Tg ATG6)生物學(xué)功能,本研究首先構(gòu)建進(jìn)化樹對(duì)Tg ATG6基因進(jìn)行同源性分析,并通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)紅色熒光的(ATG6-m Cherry)蟲株,以檢測(cè)Tg ATG6的亞細(xì)胞定位情況。通過(guò)CRISPR/Cas9技術(shù)制備Tg ATG6基因缺失蟲株,采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)該蟲株的生長(zhǎng)特性進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Tg ATG6基因在進(jìn)化關(guān)系上與植物來(lái)源的ATG6同源關(guān)系較近。Tg ATG6在蟲體內(nèi)呈彌散分布,經(jīng)16 h饑餓誘導(dǎo)后,該蛋白在弓形蟲體內(nèi)發(fā)生聚集。經(jīng)序列分析顯示,成功獲得了兩種Tg ATG6基因缺失蟲株(ΔTg ATG6-1和ΔTg ATG6-2)。在ΔTg ATG6-2蟲株中,Tg ATG6基因開放閱讀框的593~612位點(diǎn)之間插入了226 bp外源序列,而在ΔTg ATG6-2中,不能夠有效擴(kuò)增靶序列,表明兩種突變蟲株的Tg ATG6基因均被有效插入失活。此外,該基因的缺失可能影響了蟲株侵入宿主細(xì)胞的能力。Tg ATG6基因缺失株的成功制備為進(jìn)一步研究Tg ATG6蛋白功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Yeast ATG6 protein is a component of phosphatidyl alcohol 3 kinase PI3K) complex I, which promotes the formation of autophagy bodies at the beginning of autophagy.The TG ATG6 gene deletion strain was prepared by CRISPR/Cas9 and the growth characteristics of the strain were detected by flow cytometry.The results showed that the phytogenetic homology of TG ATG6 gene was close to the ATG6 homology of plant origin. The result showed that the Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii protein accumulated after 16 h starvation induced by Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii).Sequence analysis showed that two strains (螖 TG ATG6-1 and 螖 TG ATG6-2) of TG ATG6 gene deletion were successfully obtained.A 226bp exogenous sequence was inserted between the 593n612 locus of TG ATG6 gene in 螖 TG ATG6-2 strain, but the target sequence could not be amplified effectively in 螖 TG ATG6-2, indicating that the TG ATG6 gene of both mutant strains was effectively inserted inactivated.In addition, the deletion of the gene may affect the ability of the insect strain to invade host cells. The successful preparation of the deleted strain of TG ATG6 gene may lay a foundation for the further study of the function of TG ATG6 protein.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：黑龍江省自然科學(xué)基金(c2015063、201507-201807)
【分類號(hào)】：S852.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 井長(zhǎng)龍;鴿弓形蟲病的診治報(bào)告[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2000年04期

2 茍?jiān)獎(jiǎng)?犬弓形蟲病的診斷與防治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2000年11期

3 李天營(yíng),肖鵬,肖猛;犬弓形蟲病的診斷與治療[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2000年02期

4 洪雷;牛弓形蟲病[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2000年04期

5 李天營(yíng),肖鵬;犬弓形蟲病的診斷與治療[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年02期

6 艾小生;豬急性神經(jīng)型弓形蟲病的診治[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2001年12期

7 徐慧中,胡銀云;某豬場(chǎng)暴發(fā)弓形蟲病的診治[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2001年11期

8 陳敏;規(guī)模豬場(chǎng)暴發(fā)弓形蟲病的報(bào)告[J];福建畜牧獸醫(yī);2002年05期

9 沈杰;我國(guó)寄生蟲學(xué)界對(duì)弓形蟲病認(rèn)識(shí)上的飛躍[J];中國(guó)獸醫(yī)寄生蟲病;2004年02期

10 王紹琛;犬弓形蟲病的診治[J];福建畜牧獸醫(yī);2004年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 朱引潔;吳文學(xué);賀國(guó)強(qiáng);;弓形蟲病的診斷現(xiàn)狀[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

2 李輝;張健;;一例犬弓形蟲病的診斷與治療[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)小動(dòng)物醫(yī)學(xué)分會(huì)第四次學(xué)術(shù)研討會(huì)、中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)外科學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（2）[C];2009年

3 李祥瑞;;弓形蟲病的流行的新趨勢(shì)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

4 崔平;秦建華;方素芳;;河北省動(dòng)物弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

5 藺智兵;張厚雙;曹杰;周勇志;李國(guó)清;周金林;;弓形蟲real-time PCR檢測(cè)方法的建立和初步應(yīng)用[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

6 楊娜;穆名楊;李紅魁;何建斌;;中國(guó)東北地區(qū)雞源弓形蟲的流行病學(xué)調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

7 劉晶;蔡進(jìn)忠;于晉海;夏兆飛;林德貴;劉群;;幾種動(dòng)物弓形蟲病血清流行病學(xué)的初步調(diào)查[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第九次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2006年

8 王權(quán);蔣蔚;荊振宇;陳永軍;楊康;宋寧寧;崔常勇;;五種中藥體外抗弓形蟲抑制效果的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第六次代表大會(huì)暨第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

9 鞏薇;衛(wèi)禮;王吉;賀爭(zhēng)鳴;邢瑞昌;;實(shí)驗(yàn)小鼠弓形蟲檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

10 陳西岐;劉秀蘭;張克功;于德順;;貓弓形蟲病的診治[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜寄生蟲學(xué)分會(huì)第五次代表大會(huì)暨第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前7條

1 李水源;當(dāng)前豬場(chǎng)弓形蟲病的防控[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2013年

2 臨城縣畜牧局 李路民;豬得弓形蟲病 吃了貓的虧[N];河北科技報(bào);2002年

3 王志海 邵芹;犬弓形蟲病[N];中國(guó)畜牧報(bào);2003年

4 邢臺(tái)市獸醫(yī)院 邢蘭君 高社朝;豬高燒不退 沒準(zhǔn)是弓形蟲病[N];河北科技報(bào);2002年

5 劉延年;家畜弓形蟲病的防治[N];中國(guó)畜牧水產(chǎn)報(bào);2001年

6 記者 焦玉海;大熊貓“錦意”死于弓形蟲病感染[N];中國(guó)綠色時(shí)報(bào);2014年

7 胡成波;夏秋季謹(jǐn)防豬三種多發(fā)病[N];吉林農(nóng)村報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 龔國(guó)華;上海城區(qū)犬、貓弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查及藥物治療的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 尹青;弓形蟲Δbag1Δku80株的構(gòu)建及其作為貓弓形蟲病疫苗候選株的免疫原性、安全性和效力的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 徐鵬;弓形蟲新毒力基因TgMAPK1表達(dá)特性及其初步功能研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 張步彩;泰州地區(qū)豬弓形蟲血清流行病學(xué)調(diào)查及中藥治療急性感染弓形蟲小鼠效果的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

5 楊鳴發(fā);弓形蟲RH株脯氨酰氨氨基肽酶特征與功能性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 張偉超;TALEN和CRISPR技術(shù)在弓形蟲致病機(jī)制研究中的應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 李木子;弓形蟲半胱氨酸蛋白酶Metacaspases功能及作用機(jī)制[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

8 周春雪;弓形蟲Ⅱ型蟲株感染小鼠后血清及腦組織代謝組學(xué)的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

9 張東林;弓形蟲病分子診斷方法及弓形蟲分離株耐藥性的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 周永華;弓形蟲慢性感染大鼠模型的建立及其在學(xué)習(xí)記憶能力影響研究中的應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊曉宇;重組弓形蟲TRXL蛋白和EN02蛋白免疫保護(hù)力的評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 蔡玉峰;貓弓形蟲抗體ELISA檢測(cè)方法的建立與評(píng)價(jià)[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 閆曉月;弓形蟲棒狀體蛋白R(shí)OP7的生物信息學(xué)分析、原核表達(dá)及組織學(xué)定位[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

4 趙東岳;弓形蟲B1等基因Real-time PCR與截短SAG2基因克隆、表達(dá)及ELISA建立[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

5 徐穎;弓形蟲棒狀體蛋白38的序列變異及免疫保護(hù)作用研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

6 劉思嘉;弓形蟲CDPK1-EF基因的克隆表達(dá)及其免疫學(xué)特性研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

7 何瑜;南京地區(qū)雞場(chǎng)土壤與形蟲污染及其部分雞群感染情況調(diào)查[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

8 李亞麗;漯河地區(qū)豬肉旋毛蟲和弓形蟲感染調(diào)查和技術(shù)對(duì)策[D];河南工業(yè)大學(xué);2015年

9 馬依蘭·阿布來(lái)提;庫(kù)車縣周邊地區(qū)人、犬、貓感染弓形蟲情況的調(diào)查研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

10 王成雙;弓形蟲ROP46基因缺失蟲株構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1739515