本文選題：CD137L + 大腸桿菌��； 參考：《浙江大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:研究CD137L基因在大腸桿菌中的表達,通過構(gòu)建表達CD137L重組蛋白的原核表達系統(tǒng),優(yōu)化CD137L原核表達菌的表達條件,通過純化、透析復(fù)性并對蛋白的功能進行初步研究,為CD137L蛋白的開發(fā)提供工作基礎(chǔ)。方法:通過密碼子優(yōu)化的CD137L基因插入PUC18質(zhì)粒中,先將CD137L基因進行PCR擴增,構(gòu)建亞克隆載體pGEIM/CD137LT質(zhì)粒,通過NdeI和XhoI雙酶切得到目的基因,然后插入pET30a空載體,對所得重組載體進行PCR和酶切鑒定,并轉(zhuǎn)入BL21(DE3)進行表達。通過改變表達系統(tǒng)生長誘導(dǎo)過程中的單個條件因素,來尋找最優(yōu)化的表達條件:(1)培養(yǎng)基pH條件;(2)誘導(dǎo)時機;(3)KANA濃度;(4)接種量;(5)誘導(dǎo)劑濃度;(6)誘導(dǎo)溫度。在確定培養(yǎng)條件后,通過色譜柱純化蛋白,并對蛋白的功能進行初步研究。結(jié)果:通過6方面條件的實驗,最終初步得出工程菌株的最適培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達條件為:(1)培養(yǎng)基pH條件:7.09;(2)誘導(dǎo)時機:OD600≈1.1;(3)KANA濃度:50mg/L;(4)接種量:5%;(5)誘導(dǎo)劑濃度:0.25mM;(6)誘導(dǎo)溫度:370℃。將CD137L與人乳頭瘤病毒16型(HPV16)重組蛋白疫苗共同免疫腫瘤模型小鼠,觀察CD137L對HPV16重組蛋白疫苗抗腫瘤免疫效果的影響。結(jié)果表明:陰性對照組、CD137L11μg、CD137L5μg、CD137L50μg四個組中的小鼠腫瘤模型抑制率10%,HPV疫苗組的小鼠腫瘤模型抑制率為40%,HPV疫苗加CD137L1μg和HPV疫苗加CD137L5μg兩個組的小鼠腫瘤模型抑制率為90%,HPV疫苗加CD137L50μg的小鼠腫瘤模型抑制率為50%。結(jié)論:通過實驗研究,構(gòu)建并篩選得到了能有效表達CD137L蛋白的重組工程菌株。通過6個方面條件的實驗,最終得出工程菌株的最適培養(yǎng)、誘導(dǎo)表達條件。且以該培養(yǎng)條件為基礎(chǔ)表達的CD137L重組蛋白,通過純化、透析復(fù)性,可以提高人乳頭瘤病毒16型(HPV16)重組蛋白疫苗的免疫效果。
[Abstract]:Objective: to study the expression of CD137L gene in Escherichia coli and to optimize the expression conditions of CD137L prokaryotic expression strain by constructing a prokaryotic expression system expressing CD137L recombinant protein.To provide the basis for the development of CD137L protein.Methods: the CD137L gene optimized by codon was inserted into the PUC18 plasmid. The CD137L gene was amplified by PCR and subcloned vector pGEIM/CD137LT plasmid was constructed. The target gene was digested by NdeI and XhoI, then inserted into the empty pET30a vector.The recombinant vector was identified by PCR and restriction endonuclease digestion.By changing a single conditional factor in the process of growth induction of the expression system, the optimal expression condition was found to be the optimal expression condition: 1) the medium pH condition was 2) the time for inducing Kana was 4) the inoculation quantity was 5)) the concentration of inducer was 0. 6) induction temperature.After the culture conditions were determined, the protein was purified by chromatographic column, and the function of the protein was preliminarily studied.CD137L and human papillomavirus type 16 (HPV16) recombinant protein vaccine were used to immunize tumor model mice to observe the effect of CD137L on the anti-tumor immunity of HPV16 recombinant protein vaccine.The inhibition rate of tumor model was 50%.Conclusion: the recombinant engineering strain expressing CD137L protein was constructed and screened.Through the experiments of 6 aspects, the optimal culture and expression conditions of the engineering strain were obtained.The recombinant CD137L protein expressed on the basis of this culture condition can improve the immune effect of recombinant protein vaccine of human papillomavirus type 16 (HPV16) by purification and dialysis renaturation.
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：Q78

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 戎晶晶;刁振宇;周國華;;大腸桿菌表達系統(tǒng)的研究進展[J];藥物生物技術(shù);2005年06期

2 王超展;王驪麗;耿信篤;;蛋白折疊液相色譜法復(fù)性和純化大腸桿菌表達的重組人粒細胞集落刺激因子[J];色譜;2007年04期

3 錢鋒,潘衛(wèi)慶;一種蛋白質(zhì)純化流程用于提純大腸桿菌表達的蛋白片段[J];高技術(shù)通訊;2003年03期

4 解庭波;;大腸桿菌表達系統(tǒng)的研究進展[J];長江大學(xué)學(xué)報(自科版)醫(yī)學(xué)卷;2008年03期

5 李會成，王同昌，李集臨;大腸桿菌表達的真核蛋白產(chǎn)物的復(fù)性[J];生物工程進展;1994年05期

6 杜道林;王銳萍;楊國鋒;符碧;吳文芳;;長白蝮蛇類凝血酶基因大腸桿菌表達研究(英文)[J];蛇志;2006年04期

7 朱迎春,王琰,高榮凱,劉群英,化冰,陳宇萍;大腸桿菌表達的單鏈抗體柱復(fù)性的研究[J];生物技術(shù)通訊;1997年Z1期

8 凌明圣,鄒民吉,徐明波,王嘉璽,馬賢凱;大腸桿菌表達的重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子的純化[J];生物工程學(xué)報;1995年03期

9 童芹,楊勝利,龔毅;受溶氧濃度調(diào)控的新型大腸桿菌表達系統(tǒng)[J];生物工程學(xué)報;1999年03期

10 ;激素和活性多肽[J];生物技術(shù)通報;1989年05期

相關(guān)會議論文 前7條

1 劉樹滔;賴慶安;Toshihide Nishimura;饒平凡;;大腸桿菌表達的重組雞氨肽酶H的表征(英文)[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2008年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2008年

2 葛曉春;陳繼超;王文漪;曹凱鳴;孫崇榮;;非特異性脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白在幾種大腸桿菌表達系統(tǒng)中的表達比較[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

3 張小霞;嚴(yán)衛(wèi)星;徐海濱;;抗蟲蛋白Cry1Ie在大腸桿菌中的表達、純化及等同性[A];中國毒理學(xué)會第四屆全國學(xué)術(shù)會議論文（摘要）集[C];2005年

4 徐穎之;孫飛;;在大腸桿菌表達系統(tǒng)中對dCAF-1亞基的表達嘗試[A];中國晶體學(xué)會第四屆全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)會議學(xué)術(shù)論文摘要集[C];2008年

5 ;大腸桿菌表達的具有生物學(xué)活性的重組人Eppin蛋白的純化和鑒定[A];第七次中國中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會暨第二次廣東省中西醫(yī)結(jié)合泌尿外科學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

6 孫曉艷;馬立新;;一種新型的LIC載體的構(gòu)建[A];2006年度學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2006年

7 張志芳;陳寅;林旭愛;李軼女;沈桂芳;;應(yīng)用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)高溫酶[A];中國生物工程學(xué)會2006年學(xué)術(shù)年會暨全國生物反應(yīng)器學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 張穎;木糖利用重組運動發(fā)酵單胞菌的構(gòu)建及乙醇脅迫下大腸桿菌表達譜分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 許玲敏;CD137L基因大腸桿菌表達、純化及功能研究[D];浙江大學(xué);2017年

2 黃更生;大腸桿菌表達重組hbFGF結(jié)構(gòu)和功能優(yōu)化[D];暨南大學(xué);2003年

3 柳艾姣;重組人CYP3A4大腸桿菌表達系統(tǒng)的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

4 聶康群;小鼠干細胞因子的大腸桿菌表達、純化及活性測定[D];華東師范大學(xué);2005年

5 田文靜;溶栓藥物瑞替普酶（rPA）的大腸桿菌表達研究[D];天津科技大學(xué);2010年

6 高逸群;甜味蛋白（Brazzein）大腸桿菌表達系統(tǒng)的建立[D];吉林大學(xué);2006年

7 張君;大腸桿菌表達菌株BL21（DE3）的改造[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

8 鄭淑霞;酪氨酸酶基因的克隆及其野生型和變異型的大腸桿菌表達[D];福州大學(xué);2004年

9 張昱;人堿性成纖維細胞生長因子（hbFGF）cDNA的克隆和表達[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

10 檀茜倩;大腸桿菌表達片球菌素的純化工藝及其理化特性的研究[D];天津大學(xué);2010年

，

本文編號：1733420