本文選題：Bmintegrin　切入點：β　出處：《生物工程學報》2017年12期

【摘要】：整合素作為一種跨膜糖蛋白,與生物體的生理和病理等多個過程密切相關。為了探究其在家蠶中扮演的角色,通過PCR及RACE技術克隆得到了家蠶整合素β家族成員Bmintegrinβ1,通過結構域預測網站對其結構域進行了預測,并構建進化樹對其進化關系進行分析,此外通過原核表達系統(tǒng)及蛋白純化方法獲得其重組蛋白,使用重組蛋白免疫小鼠獲得其多克隆抗體,并采用半定量PCR及Western blotting方法檢測Bmintegrin β1的時空表達。文中得到家蠶整合素Bmintegrin β1的3種剪切形式,且這3種剪切體具有長為2 502 bp的開放閱讀框架,編碼833個氨基酸。根據預測該蛋白含有Integrin-B-tail、跨膜區(qū)等一系列整合素家族保守的結構域。進化樹結果表明該蛋白與同為鱗翅目成員的煙夜蛾和黑脈金斑蝶的整合素蛋白最為接近。此外我們通過原核表達系統(tǒng)及親和層析技術獲得了高純度的Bmintegrin β1蛋白,進一步制得多克隆抗體。并通過免疫印跡反應證明該抗血清能特異識別Bmintegrin β1重組蛋白。之后通過半定量PCR及免疫印跡檢測,結果顯示該蛋白在家蠶的各組織以及血細胞各時期均有較高表達且在血液中表達量最高�？傊�,這項研究為家蠶整合素家族的研究提供了基礎。
[Abstract]:Integrin as a transmembrane glycoprotein, is closely related with the organism's physiology and pathology and other processes. In order to explore the role played in the silkworm, through PCR and RACE technology cloned Bombyx mori family member Bmintegrin integrin beta 1, predict the site to predict the structure of domain by domain, and construct evolution the evolutionary relationships were analyzed by prokaryotic expression system and method for protein purification to obtain the recombinant protein using recombinant protein immunized mice polyclonal antibody, and using semi quantitative PCR and Western blotting method to detect the expression of temporal Bmintegrin beta 1. 3 splicing forms of silkworm Bmintegrin beta 1 integrin in this paper and, the 3 shear body with length of 2502 BP open reading frame encoding 833 amino acids. According to the prediction of the protein containing Integrin-B-tail, transmembrane region and a series of integration Domain family conservative. Phylogenetic tree analysis shows that the protein with Lepidoptera members of Helicoverpa assulta and the monarch of the integrin is closest. In addition we through the prokaryotic expression system and affinity chromatography to obtain high purity Bmintegrin beta 1 protein to prepare polyclonal antibody. And through the blot proved that the antiserum could specifically recognize the recombinant protein Bmintegrin beta 1. By semi quantitative PCR and Western blotting showed that the protein, in different tissues of silkworm and the period of blood cells have high expression in the blood and scale up the highest results. In conclusion, this study provides a basis for the study of silkworm integrin family.

【作者單位】： 西南大學家蠶基因組生物學國家重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金(No.31672496) 重慶自然科學基金(No.cstc2016jcyj A0425) 重慶高校創(chuàng)新團隊建設計劃(No.CXTDX201601010)資助~~
【分類號】：Q78;Q966

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本文編號：1729160