本文選題：殼寡糖-硬脂酸嫁接物(CSO-SA)　切入點(diǎn)：理化性質(zhì)　出處：《浙江大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs,以下簡稱內(nèi)異癥)是指具有生長功能的子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔以外的身體其它部位,它是一種嚴(yán)重影響婦女身心健康和生活質(zhì)量的婦科常見病。內(nèi)異癥的發(fā)病原因及機(jī)理至今仍然不清,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢,在育齡婦女中其發(fā)病率幾乎超過15%。該病所具有的良性病本質(zhì)、惡性生物學(xué)行為如侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等潛能使之成為難以治愈、危害頗大的生殖系統(tǒng)疾病之一。目前臨床治療內(nèi)異癥的方法主要是選擇藥物和手術(shù)治療,雖能不同程度地緩解癥狀,縮小病灶,但可能出現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)和復(fù)發(fā)。因此,有必要積極研究內(nèi)異癥的發(fā)生機(jī)理,探索更優(yōu)費(fèi)效關(guān)系的治療內(nèi)異癥手段,才能從根本上解決內(nèi)異癥的主要臨床問題�；蛑委�(gene therapy)是指將外源正常基因?qū)氚屑?xì)胞,以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病,以達(dá)到治療目的的一種治療方法。目前人類基因組計(jì)劃的完成為基因治療打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ),并將對醫(yī)藥工業(yè)產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。最新大量研究報(bào)道基因治療可用于腫瘤等難治性疾病,并取得了一定成效。同樣我們認(rèn)為,基因治療也可用于具有良性病本質(zhì)和惡性生物學(xué)行為的子宮內(nèi)膜異位癥的根本治療。比如使用siRNA干擾技術(shù)靜默水通道基因表達(dá),減少或抑制水通道蛋白的表達(dá);再如采用上調(diào)PEDF蛋白的表達(dá),抑制新生血管的生成,從而有望成為治療內(nèi)異癥的新方法。然而,目前基因治療技術(shù)需解決的最大問題之一,是尋找一種安全有效的基因載體遞送系統(tǒng)。非病毒載體由于具有制備簡單、無免疫原性、且安全性高等優(yōu)點(diǎn)備受研究者關(guān)注。在傳遞基因方面,最常使用的是陽離子載體,以脂質(zhì)體和微粒居多,這些研究在不同程度上取得了一些成功,但基因治療成功率與其數(shù)量成正比,必須盡可能多的量傳遞至細(xì)胞質(zhì)才能獲得理想的生物學(xué)效應(yīng)。因此,使攜帶治療基因的非病毒載體準(zhǔn)確識別靶細(xì)胞并在靶細(xì)胞中特異表達(dá)是治療的關(guān)鍵。我們根據(jù)異位內(nèi)膜上特異性的受體,對納米載體表面進(jìn)行結(jié)構(gòu)上的配體修飾,設(shè)計(jì)一種高度靶向子宮內(nèi)膜異位癥的新型納米載體,并使其介導(dǎo)基因作用于內(nèi)異癥大鼠,考察其對大鼠內(nèi)異癥的治療作用,同時(shí)探索新型靶向納米載體介導(dǎo)基因治療內(nèi)異癥的安全性和可能機(jī)制,為最終用于臨床治療內(nèi)異癥,改善現(xiàn)有藥物與手術(shù)方案療效不佳的問題提供新思路、新方法。第一部分靶向納米給藥系統(tǒng)的制備及其體外性質(zhì)研究目的:篩選并優(yōu)化靶向納米給藥系統(tǒng)。方法:以碳二亞胺法制備殼寡糖-硬脂酸嫁接物(CSO-SA)。采用芘熒光法測定嫁接物在水中的臨界膠團(tuán)濃度,采用三硝基苯磺酸法測定氨基取代度。采用質(zhì)粒DNA(PEDF)作為報(bào)告基因,制備CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)。透射電子顯微鏡觀察其表面形態(tài),微粒粒度與表面電位測定儀測定CSO-SA/PEDF納米給藥系統(tǒng)粒徑與表面電位,凝膠阻滯分析考察CSO-SA與PEDF間的密接程度,研究CSO-S A/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)的生物穩(wěn)定性,MTT法測定細(xì)胞毒性。結(jié)果:采用化學(xué)嫁接方法,得到CSO-SA,氨基取代度為13%,其在水中的臨界膠團(tuán)濃度為0.025 mg · mL-1。當(dāng)N/P為9.6時(shí),CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)的粒徑為135.6nm,電位為6.4±0.1mV。透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)CSO-SA/PEDF納米給藥系統(tǒng)大小均勻,呈球形。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞毒性明顯小于脂質(zhì)體,轉(zhuǎn)染效率高。結(jié)論:初步顯示了這種新型的基因載體高效低毒的特性。第二部分靶向納米載體介導(dǎo)PEDF治療子宮內(nèi)膜異位癥的療效及機(jī)制研究目的:為了減少子宮內(nèi)膜異位癥藥物治療引起的副作用,改善臨床治療對策,設(shè)計(jì)研究CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)治療子宮內(nèi)膜異位癥的可行性,并初步探索機(jī)制。方法:采用第一部分內(nèi)容制備的CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng),尾靜脈注射后考察CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)在子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠中的分布情況;經(jīng)CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)治療一個(gè)療程后(2周),觀察其對異位病灶的影響,考察異位病灶細(xì)胞凋亡、微血管密度、VEGF表達(dá)等各項(xiàng)指標(biāo)的變化。電子顯微鏡法觀察CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)對生殖器官是否有不良反應(yīng)。結(jié)果:PEDF由CSO-SA介導(dǎo)后可分布到子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠的異位病灶組織。CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)的治療可引起子宮內(nèi)膜異位病灶縮小,使異位子宮內(nèi)膜明顯萎縮,微血管密度明顯降低。CSO-SA/PEDF治療組的子宮內(nèi)膜異位病灶細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著增加。但CSO-SA/PEDF治療組的子宮和卵巢組織的病理形態(tài)學(xué)未見明顯異常,超微結(jié)構(gòu)觀察亦未見明顯異常。結(jié)論:CSO-SA/PEDF基因納米給藥系統(tǒng)可用作子宮內(nèi)膜異位癥的有效治療方法。第三部分特異性靶向納米載體介導(dǎo)AQP2-siRNA治療子宮內(nèi)膜異位癥的療效及機(jī)制研究目的:為研究新的治療子宮內(nèi)膜異位癥的方法,構(gòu)建特異性靶向納米載體,并研究特異性靶向納米載體介導(dǎo)AQP2-siRNA治療內(nèi)異癥的療效及可能機(jī)制。方法:化學(xué)合成法制備殼寡糖-聚乙烯亞胺復(fù)合物(Polyethylenimine grafted chitosan oligosaccharide,CSO-PEI)。通過正負(fù)電吸附原理構(gòu)建AQP2-siRNA基因納米給藥系統(tǒng),并根據(jù)基因濃度制備不同N/P的基因納米給藥系統(tǒng)。通過共同孵育的方法物理包裹透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)。凝膠阻滯分析考察陽離子嫁接物與AQP2-siRNA的密接程度,研究納米給藥系統(tǒng)的生物穩(wěn)定性。原子力顯微鏡觀察其表面形態(tài),微粒粒度與表面電位測定儀測定(CSO-PEI/siRNA)HA納米給藥系統(tǒng)粒徑與表面電位,MTT法測定細(xì)胞毒性。熒光嫁接法(FITC)考察細(xì)胞攝取情況,在體熒光顯微鏡法觀察基因納米給藥系統(tǒng)在模型動物體內(nèi)的分布。尾靜脈注射(CSO-PEI/siRNA)HA納米給藥系統(tǒng)和生理鹽水,治療一個(gè)療程后觀察其對大鼠子宮內(nèi)膜異位癥病灶大小的影響和病理學(xué)形態(tài)變化。直觀比較子宮內(nèi)膜異位癥病灶凋亡、內(nèi)異組織CD44表達(dá)情況、微血管密度變化等各項(xiàng)指標(biāo),分析(CSO-PEI/siRNA)HA對異位病灶細(xì)胞的促凋亡作用,考察(CSO-PEI/siRNA)HA對新生血管生成的抑制作用,透射電子顯微鏡法觀察(CSO-PEI/siRNA)HA對模型大鼠子宮、卵巢等生殖器官臟器是否有不良反應(yīng)。結(jié)果:1.(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)物理穩(wěn)定性好,形態(tài)分布均勻。2.(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)細(xì)胞毒性小,攝取能力強(qiáng)。3.(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)可通過HA配體特異性靶向內(nèi)異細(xì)胞 CD44。4.(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)在體內(nèi)子宮內(nèi)膜囊腫部位的分布明顯高于對照組。5.(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)治療組可使異位病灶大小明顯縮小,異位子宮內(nèi)膜出現(xiàn)明顯的萎縮跡象。6.(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)治療組的血管密度顯著降低。7.(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)治療組異位病灶細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于對照組。8.(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)治療組對生殖器官臟器無明顯不良反應(yīng)。9.內(nèi)異組織中的CD44表達(dá)量明顯高于正常內(nèi)膜組織中的表達(dá);當(dāng)(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)治療后CD44表達(dá)量明顯降低。結(jié)論:(CSO-PEI/siRNA)HA基因納米給藥系統(tǒng)可以治療大鼠子宮內(nèi)膜異位癥,并未見明顯副作用。治療作用可能的機(jī)制是通過特異性靶向內(nèi)異組織部位,抑制異位病灶的新生血管的生成,促進(jìn)異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R711.71;R450

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 程志霞,劉永新,師淑婉;子宮內(nèi)膜異位癥66例臨床分析[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2000年05期

2 郝群,史常旭;子宮內(nèi)膜異位癥中表皮生長因子受體的表達(dá)及臨床意義[J];江蘇醫(yī)藥;2000年11期

3 白淑坤,黃永芝;腹股溝子宮內(nèi)膜異位癥1例[J];中國實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2000年04期

4 方素云,閻建忠,呂昌龍,王永來,付國;轉(zhuǎn)化生長因子-β_1與子宮內(nèi)膜異位癥關(guān)系的研究[J];中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2000年03期

5 ;子宮內(nèi)膜異位癥學(xué)術(shù)研討會征文通知[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2000年08期

6 胡淑琴,李明,管曉燕,董建美;中藥祛癥靈灌腸用于子宮內(nèi)膜異位癥的護(hù)理要點(diǎn)[J];中華護(hù)理雜志;2000年12期

7 朱掌珠,張學(xué)珍;超聲診斷子宮內(nèi)膜異位癥80例[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年03期

8 郝亞華,董笑平,嚴(yán)玉清,馮丹紅,孫振龍,孫大平;105例子宮內(nèi)膜異位癥誤診原因分析[J];長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2000年02期

9 楊鳳琴;多發(fā)性頑固性子宮內(nèi)膜異位癥1例[J];邯鄲醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào);2000年06期

10 郭學(xué)卿;子宮內(nèi)膜異位癥126例臨床分析[J];邯鄲醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校學(xué)報(bào);2000年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張偉秋;;子宮內(nèi)膜異位癥66例臨床分析[A];紀(jì)念卓越的人民醫(yī)學(xué)家林巧稚大夫誕辰100周年——全國婦產(chǎn)科高級學(xué)術(shù)論壇論文集[C];2001年

2 周群芳;朗景和;冷金花;;骨橋蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥在位及異位內(nèi)膜中的表達(dá)[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 林俊;陳志文;;子宮內(nèi)膜異位癥的診斷[A];2005年浙江省婦產(chǎn)科學(xué)暨計(jì)劃生育學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

4 蘇紅;黃曉陽;;子宮內(nèi)膜異位癥相關(guān)不孕的研究現(xiàn)狀[A];湖北省性學(xué)會第二屆第二次學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

5 勾寶華;;子宮內(nèi)膜異位癥患者健康知識需求調(diào)查[A];全國婦產(chǎn)科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2006年

6 徐紅;歐奇志;況燕;徐文生;張瑋;;動態(tài)檢測子宮內(nèi)膜異位癥患者血清血管內(nèi)皮生長因子的臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國婦科腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 李亞里;岳莉;;子宮內(nèi)膜異位癥血清指標(biāo)臨床診斷探討[A];中華醫(yī)學(xué)會第一屆全球華人婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)大會暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

8 盧琴華;;子宮內(nèi)膜異位癥與不孕[A];肢體傷殘康復(fù)與護(hù)理學(xué)術(shù)論文集[C];1995年

9 馬彩虹;;子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕[A];全國第三屆不育癥暨保留生育功能微創(chuàng)手術(shù)研討會論文集[C];2008年

10 楊冬梓;;子宮內(nèi)膜異位癥合并不育癥處理中的熱點(diǎn)問題[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議婦科內(nèi)分泌會場（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 周虹;子宮內(nèi)膜異位癥成為婦科第二大常見病[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2007年

2 教授 孫大為;子宮內(nèi)膜異位癥對生育有多大影響[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2008年

3 士平;子宮內(nèi)膜異位癥不可輕視[N];中國婦女報(bào);2000年

4 黃海平 副主任醫(yī)師;適量運(yùn)動，，預(yù)防子宮內(nèi)膜異位癥[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2001年

5 舒楚強(qiáng);子宮內(nèi)膜異位癥與不孕[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

6 蘭州現(xiàn)代中醫(yī)藥研所 史建鋼;子宮內(nèi)膜異位癥能否根治？[N];甘肅日報(bào);2004年

7 北京朝陽醫(yī)院婦產(chǎn)科主治醫(yī)師 李淑紅;腹腔鏡診治子宮內(nèi)膜異位癥[N];健康報(bào);2003年

8 健康時(shí)報(bào)特約記者 吉爾;產(chǎn)后子宮內(nèi)膜異位癥咋治療？[N];健康時(shí)報(bào);2005年

9 夢月;年輕女性健康的威脅——子宮內(nèi)膜異位癥[N];中國勞動保障報(bào);2002年

10 吳凡;張海峰;陳思亮;異位散治療子宮內(nèi)膜異位癥[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 吳志勇;尼古丁對子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞力學(xué)特征的影響及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

2 賈云波;HIF-1a及其調(diào)控因子PHD2、VHL在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及補(bǔ)腎溫陽化瘀方對其影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 侯震暉;IVF-ET周期中子宮內(nèi)膜異位癥性不孕患者體重指數(shù)、糖脂代謝變化及相關(guān)機(jī)理研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

4 王娜娜;活血中藥抑制盆腔子宮內(nèi)膜異位癥保守術(shù)后復(fù)發(fā)的療效評價(jià)[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2016年

5 廖慧慧;五子四物加減方用于子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者腹腔鏡術(shù)后的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

6 詹宏;PRL-3及其參與的SOCS3/JAK2/STAT3通路在子宮內(nèi)膜異位癥中的作用和機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2016年

7 李娟清;Twist異常甲基化介導(dǎo)的細(xì)胞遷移和侵襲在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制中的作用[D];浙江大學(xué);2017年

8 趙夢丹;靶向納米載體介導(dǎo)基因治療子宮內(nèi)膜異位癥的療效及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2017年

9 王良;蛋白質(zhì)質(zhì)譜高通量分析平臺的建立及其在子宮內(nèi)膜異位癥中的應(yīng)用性研究[D];浙江大學(xué);2010年

10 宋楠;子宮內(nèi)膜異位癥疼痛與瞬時(shí)受體電位辣椒素亞型-1表達(dá)的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 于玲;山東濟(jì)南地區(qū)子宮內(nèi)膜異位癥的流行病學(xué)研究[D];山東大學(xué);2005年

2 曹勛榮;子宮內(nèi)膜異位癥治療療效及復(fù)發(fā)相關(guān)因素分析[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

3 金旺紅;子宮內(nèi)膜異位癥術(shù)后復(fù)發(fā)臨床分析[D];延邊大學(xué);2015年

4 季麗梅;子宮內(nèi)膜異位癥術(shù)后GnRHa聯(lián)合反加療法的效果評估[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 王云;MMP-2、IL-4、IFN-γ在子宮內(nèi)膜異位癥中表達(dá)的相關(guān)性分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 李賓;E-鈣粘蛋白基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 董悅文;活性氧簇及總抗氧化能力在子宮內(nèi)膜異位癥患者血清、卵泡液及顆粒細(xì)胞中的表達(dá)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 史少文;RLx及VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 褚麗娜;IGFBP3基因多態(tài)性與子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 亓文博;腹腔鏡聯(lián)合藥物治療中、重度子宮內(nèi)膜異位癥的療效分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

本文編號：1725785