本文選題：eis基因　切入點(diǎn)：pMV　出處：《中國(guó)畜牧獸醫(yī)》2017年07期

【摘要】：試驗(yàn)旨在構(gòu)建牛分枝桿菌eis基因的穿梭表達(dá)載體,鑒定其在重組恥垢分枝桿菌中的生物學(xué)活性。采用PCR技術(shù)擴(kuò)增并克隆牛分枝桿菌eis基因,構(gòu)建大腸桿菌-分枝桿菌穿梭表達(dá)載體pMV261-Mbeis,經(jīng)雙酶切和測(cè)序鑒定其正確性,利用電穿孔法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至恥垢分枝桿菌mc2155中,采用SDS-PAGE和Western blotting技術(shù)檢測(cè)牛分枝桿菌eis基因在恥垢分枝桿菌中的表達(dá),質(zhì)譜鑒定目的蛋白氨基酸序列。研究結(jié)果表明,成功構(gòu)建了牛分枝桿菌eis基因穿梭表達(dá)載體pMV261-Mbeis;生長(zhǎng)曲線表明負(fù)載重組質(zhì)粒不會(huì)影響恥垢分枝桿菌的體外生長(zhǎng);SDS-PAGE和Western blotting檢測(cè)證實(shí)了牛分枝桿菌eis基因在恥垢分枝桿菌中可表達(dá)出分子質(zhì)量約44ku的eis蛋白;質(zhì)譜檢測(cè)證明了該蛋白即為牛分枝桿菌eis蛋白。本研究構(gòu)建的牛分枝桿菌eis基因穿梭表達(dá)質(zhì)粒pMV261-Mbeis在恥垢分枝桿菌中具有生物學(xué)活性,為下一步研究表達(dá)產(chǎn)物eis蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to test the shuttle expression vector construction of EIS gene of Mycobacterium bovis, identification of the recombinant Mycobacterium smegmatis in biological activity. The amplification and cloning of EIS gene of Mycobacterium bovis by using PCR technology, construction of Escherichia coli Mycobacterium shuttle plasmid pMV261-Mbeis by double enzyme digestion and DNA sequencing. The recombinant plasmid was transformed into the correctness. To Mycobacterium smegmatis mc2155 by electroporation, to detect the expression of EIS gene of Mycobacterium bovis in Mycobacterium smegmatis by SDS-PAGE and Western Blotting Technology, mass spectrometry identification of target protein amino acid sequence. The results show that the successful construction of EIS gene of Mycobacterium bovis shuttle expression vector pMV261-Mbeis; growth curve showed that the recombinant load the plasmid does not affect the growth of Mycobacterium smegmatis in vitro; SDS-PAGE and Western blotting confirmed the detection of Mycobacterium bovis EIS gene in Mycobacterium smegmatis Bacteria can express a molecular mass of about 44ku EIS protein; mass spectrometry showed that the protein is the EIS protein of Mycobacterium bovis EIS gene of cattle. The constructed shuttle plasmid pMV261-Mbeis with biological activity in Mycobacterium smegmatis, which lays the foundation for further research of EIS protein products function.

【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31302130) 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程(ASTIP-IAS-11)
【分類號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：1719518