本文選題：黑色素瘤　切入點：pim-基因　出處：《中國腫瘤生物治療雜志》2017年10期

【摘要】：目的:觀察靶向沉默原癌基因pim-3對小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16的抑制作用。方法:用脂質(zhì)體將特異性靶向沉默pim-3載體(pim-3-shRNA)和pim-3過表達(dá)載體(pim-3-MIGR1)轉(zhuǎn)染到黑色素瘤細(xì)胞B16中,熒光定量PCR和Western blotting法檢測pim-3 mRNA和蛋白表達(dá)的變化,Annexin V/PI染色和TUNEL染色檢測細(xì)胞凋亡情況,熒光定量PCR和Western blotting法檢測pBad、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、caspase-3等凋亡相關(guān)分子表達(dá)的變化,MTT法檢測細(xì)胞增殖情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期,RTCAxCELLigence系統(tǒng)檢測細(xì)胞遷移情況,Transwell侵襲實驗檢測細(xì)胞侵襲的變化。結(jié)果:轉(zhuǎn)染pim-3-sh RNA組B16細(xì)胞的pim-3mRNA及蛋白表達(dá)較對照組明顯下降(P0.05),轉(zhuǎn)染pim-3過表達(dá)質(zhì)粒組B16細(xì)胞的pim-3 mRNA及蛋白表達(dá)較對照組顯著增加(P0.05)。轉(zhuǎn)染pim-3-shRNA后,B16細(xì)胞的凋亡明顯增加,在此基礎(chǔ)上共轉(zhuǎn)pim-3過表達(dá)質(zhì)粒后則明顯逆轉(zhuǎn)沉默pim-3所引起的凋亡(P0.05);進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)沉默pim-3明顯下調(diào)凋亡相關(guān)分子p-Bad、Bcl-2、Bcl-xl的表達(dá),上調(diào)Bax的表達(dá),最終引起caspase-3活性增加(P0.05)。沉默pim-3后B16細(xì)胞增殖和遷移受到抑制(P0.05),而細(xì)胞周期無明顯變化。結(jié)論:靶向沉默pim-3基因能促進(jìn)黑色素瘤細(xì)胞的凋亡,抑制細(xì)胞的增殖和遷移,提示pim-3基因可以作為黑色素瘤基因治療的新靶點。
[Abstract]:Aim: to observe the inhibitory effect of targeted silencing proto-oncogene pim-3 on murine melanoma cell line B16. Methods: specific targeting silencing pim-3 vector pim-3-shRNAand pim-3 overexpression vector pim-3-MIGR1 were transfected into murine melanoma cell B16 by liposome. The changes of pim-3 mRNA and protein expression were detected by fluorescence quantitative PCR and Western blotting. Apoptosis was detected by Annexin V/PI staining and TUNEL staining, and the expression of apoptosis-related molecules such as pBad-2Bcl-xlBaxcaspase-3 was detected by fluorescence quantitative PCR and Western blotting. Cell migration was detected by flow cytometry. The expression of pim-3mRNA and protein in B16 cells transfected with pim-3-sh RNA was significantly lower than that in control group. Pim-3 overexpression was detected by transwell invasion assay. The expression of pim-3 mRNA and protein in plasmid group B16 cells was significantly higher than that in control group. After transfection of pim-3-shRNA, apoptosis of B16 cells was significantly increased. On this basis, the overexpression plasmid of pim-3 reversed the apoptosis induced by silencing pim-3, and the expression of p-Bad-Bcl-2pcl-xl was down-regulated and the expression of Bax was upregulated by silencing pim-3, and the expression of p-Bad-Bcl-2mBcl-xl was down-regulated by silencing pim-3. The proliferation and migration of B16 cells were inhibited after pim-3 silencing, but the cell cycle did not change significantly. Conclusion: the targeted silencing of pim-3 gene can promote the apoptosis of melanoma cells and inhibit the proliferation and migration of B16 cells. The results suggest that pim-3 gene can be used as a new target for melanoma gene therapy.
【作者單位】： 山東大學(xué)藥學(xué)院免疫藥理和免疫治療研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81472646,No.81273220,No.91442114)~~
【分類號】：R739.5

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本文編號：1688619