本文選題：蛋白激酶OsCIPK　切入點(diǎn)：生物信息學(xué)分析　出處：《福建農(nóng)業(yè)學(xué)報》2017年04期

【摘要】：在植物生長發(fā)育中,CIPKs(CBL-interacting protein kinases)在脅迫信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和增強(qiáng)抗逆途徑中發(fā)揮著重要作用,而OsCIPK5的具體功能還未知。為了研究OsCIPK5的功能,本研究從日本晴水稻中成功克隆了OsCIPK5基因。用生物信息學(xué)方法對其編碼的蛋白進(jìn)行分析,結(jié)果表明OsCIPK5含有2個功能區(qū)即激酶活性區(qū)和NAF區(qū),OsCIPK5與5種植物的CIPK5同源性較高,而與短花藥野生稻CIPK5的同源性最高(94%),親緣關(guān)系最近。利用植物生理學(xué)方法對水稻進(jìn)行低鉀處理,結(jié)果表明水稻根中OsCIPK5受低鉀誘導(dǎo)表達(dá),而葉片中OsCIPK5表達(dá)量沒有變化;同時構(gòu)建了OsCIPK5與黃色熒光蛋白基因融合的植物瞬時表達(dá)載體,共聚焦顯微鏡觀察顯示,OsCIPK5編碼的蛋白主要定位在細(xì)胞核、細(xì)胞膜,還以顆粒狀結(jié)構(gòu)不規(guī)則分布在細(xì)胞質(zhì)中。進(jìn)一步構(gòu)建了OsCIPK5的RNAi載體,通過水稻遺傳轉(zhuǎn)化體系獲得26株陽性轉(zhuǎn)基因水稻。熒光定量PCR(Real-time qPCR)分析表明,T1代轉(zhuǎn)基因水稻中OsCIPK5的表達(dá)量與野生型相比顯著降低。OsCIPK5的生物信息學(xué)分析、植物生理學(xué)分析、亞細(xì)胞定位以及RNAi轉(zhuǎn)基因水稻的獲得為研究OsCIPK5的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In plant growth and development, CIPKS CBL interacting protein plays an important role in stress signal transduction and stress resistance pathway, but the specific function of OsCIPK5 is unknown. In this study, OsCIPK5 gene was cloned successfully from Japanese rice, and its protein was analyzed by bioinformatics. The results showed that OsCIPK5 contained two functional regions, namely, kinase active region and NAF region, and OsCIPK5 had high homology with five species of plants. The results showed that OsCIPK5 was induced by low potassium in rice roots, but OsCIPK5 expression in leaves did not change. At the same time, a plant transient expression vector with OsCIPK5 and yellow fluorescent protein gene fusion was constructed. Confocal microscopy showed that OsCIPK5 encoded protein mainly located in nucleus and cell membrane. The RNAi vector of OsCIPK5 was further constructed by irregular distribution of granular structure in the cytoplasm. Twenty-six positive transgenic rice were obtained from rice genetic transformation system. Fluorescence quantitative PCR(Real-time qPCR analysis showed that the expression of OsCIPK5 in transgenic rice of T 1 generation was significantly lower than that of wild type. The bioinformatics analysis and plant physiology analysis of OsCIPK5 were carried out. Subcellular localization and the acquisition of RNAi transgenic rice lay a foundation for studying the function of OsCIPK5.
【作者單位】： 福建農(nóng)林大學(xué)植物病毒研究所/福建省植物病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：福建省科技計劃重大前期項(xiàng)目(2012N4001) 教育部博士點(diǎn)基金(20123515120005) 福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2014J06011) 福建省高校杰出青年科研人才培育計劃(JA13092) 福建農(nóng)林大學(xué)杰出青年科研人才培養(yǎng)專項(xiàng)基金項(xiàng)目(xjq201402)
【分類號】：S511

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