本文選題：番茄　切入點：新疆沙冬青　出處：《沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：番茄作為蔬菜栽培中的第一大作物,其適宜的溫度范圍為13～33℃。在我國設(shè)施番茄栽培中,冬春季節(jié)的低溫成為影響番茄產(chǎn)量與質(zhì)量的重要限制因子。而普通番茄中抗低溫種質(zhì)資源匱乏,本試驗針對從生長在極端低溫環(huán)境中的新疆沙冬青幼苗低溫誘導(dǎo)差減抑制雜交庫中分離到的肌醇半乳糖苷合成酶基因EST片段(命名為AnGolS1)利用RACE方法,獲得了AnGolS1全長序列(GenBank登錄號：GU942748),分析了基因及其編碼蛋白的特性,研究了低溫下該基因的表達模式,并在此基礎(chǔ)上,將該基因轉(zhuǎn)入栽培番茄中,以期提高栽培番茄對低溫的抗性。論文的主要結(jié)論如下：(1)根據(jù)pET30a(+)具有HIS標簽的特性,利用酶切連接的方法構(gòu)建了pET30a(+)-AnGolS1重組質(zhì)粒；利用IPTG誘導(dǎo)AnGolS1融合蛋白表達,Ni+樹脂純化融合蛋白并用來催化底物反應(yīng)；通過HPLC分析不同反應(yīng)時間產(chǎn)物肌醇半乳糖苷的含量,AnGolS1催化底物反應(yīng)非常迅速,推測AnGolS1很可能是一個快速反應(yīng)酶并且酶活性有效時間為40min。(2)利用qRT-PCR技術(shù)分析不同脅迫下幼苗根、莖及葉中AnGolS1表達量變化,結(jié)果顯示：AnGolS1基因僅在低溫脅迫下高效表達,尤其是莖中高達334.5倍；而在干旱和高鹽脅迫下并沒有明顯的上調(diào)表達變化,這說明AnGolS1僅是一個低溫誘導(dǎo)基因。(3)低溫處理新疆沙冬青幼苗,對根、莖、葉分別取樣并進行石蠟包埋和切片；構(gòu)建探針質(zhì)粒并合成DIG-labeling探針,進行ISH原位雜交實驗。光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：低溫脅迫下,莖中束中形成層細胞有非常明顯的雜交信號,而周圍木質(zhì)部、韌皮部和皮層等細胞卻并不明顯；同時,根和葉片木質(zhì)部周圍也存在比較明顯的雜交信號,這些結(jié)果說明莖束中形成層細胞很可能擔(dān)負著AnGolS1的合成、轉(zhuǎn)運和協(xié)調(diào)作用。(4)根據(jù)Gateway轉(zhuǎn)基因技術(shù)要求構(gòu)建轉(zhuǎn)基因重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌,農(nóng)桿菌介導(dǎo)侵染番茄子葉,抗性培養(yǎng)基培育愈傷組織獲得番茄幼苗；利用PCR擴增及活體熒光檢測鑒定陽性轉(zhuǎn)基因植株,最終獲得了25株AnGolS1轉(zhuǎn)基因番茄T0代植株,其中有4株可能是多拷貝植株,為下一步研究番茄抗寒性提供了重要的實驗材料。
[Abstract]:Tomato, as the largest crop in vegetable cultivation, has a suitable temperature range of 13 ~ 33 鈩，

本文編號：1675752