本文選題：ClC-氯通道　切入點：HeLa細(xì)胞　出處：《中國病理生理雜志》2017年02期

【摘要】：目的:探討沉默HeLa細(xì)胞的ClC-3氯通道基因后細(xì)胞周期分布的變化及其作用機制。方法:依照siRNA設(shè)計原則構(gòu)建沉默ClC-3基因的ClC-3 siRNA并轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞;實驗分為空白對照組(control組)、轉(zhuǎn)染試劑對照組(Lipo組)、陰性對照組(negative siRNA組)和ClC-3 siRNA組。采用real-time PCR檢測ClC-3 siRNA的沉默效率;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布情況;Western blot檢測ClC-3蛋白及相關(guān)細(xì)胞周期蛋白(cyclin)D1、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4、CDK6、P21和P27等表達(dá)。結(jié)果:CIC-3 siRNA成功沉默HeLa細(xì)胞的ClC-3基因。和其它組相比,ClC-3 siRNA組的細(xì)胞周期被阻抑在G_0/G_1期。CIC-3 siRNA組的cyclin D1、CDK4和CDK6蛋白表達(dá)水平明顯下降,P21和P27蛋白表達(dá)水平明顯上升。結(jié)論:沉默HeLa細(xì)胞ClC-3氯通道基因可影響cyclin D1、CDK4、CDK6、P21和27蛋白的表達(dá)水平膽抑HeLa細(xì)胞周期停滯在G_0/G_1期。
[Abstract]:Objective: to investigate the changes of cell cycle distribution after ClC-3 chloride channel gene silencing in HeLa cells and its mechanism. Methods: ClC-3 siRNA of ClC-3 gene silencing was constructed according to siRNA design principle and transfected into HeLa cells. The experiment was divided into blank control group, transfection reagent control group, negative siRNA group and ClC-3 siRNA group. The silencing efficiency of ClC-3 siRNA was detected by real-time PCR. Flow cytometry was used to detect the distribution of cell cycle. Western blot was used to detect the expression of ClC-3 protein and cyclin D 1, cyclin dependent kinases, cyclin dependent kinase 4, CDK6, P21 and P27. Results the ClC-3 gene of HeLa cells was successfully silenced by siRNA. Compared with the control group, the cell cycle was inhibited in G_0/G_1 phase. CIC-3 siRNA group, the expression level of cyclin D1CDK4 and CDK6 protein decreased significantly. Conclusion: ClC-3 chloride channel gene silencing HeLa cells can affect cyclin D1 CDK4CDK4CDK6P21 and 27 eggs. White expression level inhibited HeLa cell cycle arrest in G_0/G_1 phase.
【作者單位】： 廣東藥科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院生理學(xué)系;暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系;暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81272223;No.81273539) 廣東藥科大學(xué)“創(chuàng)新強校工程”-廣東高校省級重點平臺和重大科研項目:青年創(chuàng)新人才類項目(No.2015cxqx165)
【分類號】：R329.2

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本文編號：1659913