本文選題：原發(fā)性高血壓　切入點：單核苷酸多態(tài)性　出處：《首都醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景線粒體融合蛋白2(mitofusion-2,Mfn2;曾命名為增殖抑制基因,hyperplasia suppressor gene,HSG),是由我國學(xué)者陳光慧等利用差異顯示技術(shù)對自發(fā)性高血壓大鼠(spontanously hypertensive rats,SHRs)和正常血壓大鼠(Wistar Kyoto rats,WKY)的血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)進行RNA圖譜分析時克隆獲得的,并且發(fā)現(xiàn)其在SHRs的VSMCs中低表達,而在WKY的VSMCs中高表達,提示Mfn2基因可能為一種高血壓相關(guān)基因,進一步的研究發(fā)現(xiàn)過表達Mfn2基因可顯著抑制VSMCs的表達,主要通過Ras-Raf-ERK/MAPK信號途徑,使細胞周期停滯于G0/G1期,提示Mfn2為一種重要的抑制VSMCs增殖的因子。近期研究還發(fā)現(xiàn)Mfn2基因與胰島素抵抗、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等病理過程有關(guān)。而血管平滑肌細胞增殖、胰島素抵抗及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在原發(fā)性高血壓(essential hypertension,EH)的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。因此我們推測Mfn2為EH的重要候選基因之一,該基因上的單核苷酸多態(tài)性位點(single nucleotide polymorphisms,SNPs)可能與EH發(fā)病風(fēng)險存在相關(guān)。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI)是目前臨床上經(jīng)常使用的降壓藥物之一,其降壓療效已得到廣泛認可。然而高血壓患者人群對ACEI類藥物的降壓療效的反應(yīng)存在個體差異,研究表明遺傳因素對這種差異的影響可達50%以上,已有研究報道多種基因的變異位點與ACEI類藥物降壓療效存在相關(guān)性。ACEI類藥物作用靶點血管緊張素II(angiotensin II,Ang II)除了能調(diào)節(jié)體內(nèi)水鈉平衡,還能通過Ras-Raf-ERK1/2信號通路刺激VSMCs的收縮和增殖,在高血壓及其靶器官損害的過程中起重要作用。一系列體內(nèi)外實驗表明Mfn2可以通過與Ras結(jié)合進而抑制Ang II誘導(dǎo)的ERK1/2活性發(fā)揮抗細胞增殖作用。提示Ang II與Mfn2可能存在相互作用,共同參與VSMCs的收縮及增殖,進而影響血壓的變化。此外,研究發(fā)現(xiàn)Mfn2基因表達與自發(fā)性高血壓大鼠主動脈重塑呈負相關(guān),ACEI類藥物可以上調(diào)Mfn2基因表達,減輕主動脈重塑。因此,我們推測Mfn2可能作為ACEI類藥物的間接靶點,Mfn2基因上的SNPs可能會影響ACEI類藥物在高血壓人群中的降壓療效。長期高血壓會引起心臟結(jié)構(gòu)及功能的改變包括左室肥厚的發(fā)生,流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示,左室肥厚是心源性死亡的獨立危險因素。左室結(jié)構(gòu)及功能改變除了受血壓水平的影響之外,還受性別、年齡、高血壓病史及藥物治療、肥胖、糖尿病、遺傳因素等因素的影響,其中遺傳因素對左心室心肌的影響占非血壓因素的60%,闡明與左室肥厚、左室結(jié)構(gòu)及功能改變的基因?qū)τ诟玫乩斫馄浒l(fā)病機理非常重要。一系列體內(nèi)外實驗研究表明Mfn2基因在心肌肥厚模型中低表達,而過表達Mfn2基因后可以減輕左室肥厚的發(fā)生,因此我們推測Mfn2基因的改變可能與左室結(jié)構(gòu)及功能改變之間存在相關(guān)性。由于Mfn2基因編碼的蛋白質(zhì)在調(diào)節(jié)血管平滑肌細胞增殖、胰島素抵抗、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、Ras-Raf-ERK1/2信號通路以及心肌細胞肥大等方面發(fā)揮重要作用,我們推測Mfn2基因可能與原發(fā)性高血壓、ACEI類藥物的降壓療效及高血壓的靶器官損害(左室結(jié)構(gòu)及功能改變)均密切相關(guān)。本研究擬采用候選基因策略評估Mfn2基因與原發(fā)性高血壓、ACEI類藥物的降壓療效及高血壓患者左室結(jié)構(gòu)及功能的相關(guān)性。目的1.評估Mfn2基因多態(tài)性位點是否與中國北方漢族人群EH發(fā)病風(fēng)險之間存在相關(guān)性,為EH的早期風(fēng)險評估提供遺傳學(xué)理論依據(jù)。2.評估Mfn2基因多態(tài)性位點是否與ACEI類降壓藥物在EH人群中的降壓療效存在相關(guān)性,為臨床上個體化使用ACEI類降壓藥提供理論依據(jù)。3.評估Mfn2基因多態(tài)性位點是否與新發(fā)原發(fā)性高血壓患者左室結(jié)構(gòu)及功能的超聲指標存在相關(guān)性,為心臟靶器官損害臨床標志物的篩選提供參考。方法1.收集中國北方漢族人群626例原發(fā)性高血壓患者及618例正常血壓的對照者臨床基線資料及血液樣本,運用Taq Man-MGB等位基因分型技術(shù)及ABI9700基因檢測平臺對入選者Mfn2基因上6個標簽SNP位點(rs2336384、rs2295281、rs17037564、rs2236057、rs2236058和rs3766741)進行基因分型的檢測,評估上述SNP位點與EH發(fā)病風(fēng)險的關(guān)系。通過對上述各個SNP位點的單位點關(guān)聯(lián)分析、分層分析、連鎖不平衡及單倍型分析,分別研究每個SNP位點及其組成的單倍型與EH發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性。利用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析。利用Haploview及PLINK軟件進行連鎖不平衡及單倍型分析。2.收集126例中國北方漢族新發(fā)的輕到中度原發(fā)性高血壓患者,給予口服ACEI(貝那普利)單藥治療,根據(jù)隨訪8周后的血壓變化情況進行降壓效果的評定。采用候選基因策略對Mfn2基因的6個標簽SNP位點與ACEI類藥物降壓療效及幅度進行相關(guān)性分析。采用Taq Man-MGB方法對這6個SNP位點進行基因型檢測,利用網(wǎng)絡(luò)軟件進行Hardy-Weinberg平衡檢驗,利用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析。3.收集355例中國北方漢族新發(fā)的輕到中度原發(fā)性高血壓患者,進行Mfn2基因6個標簽SNP位點(rs2236384,rs2295281,rs17037564,rs2236057,rs2236058及rs3766741)與代表左室結(jié)構(gòu)及功能的超聲指標之間的相關(guān)性研究。通過調(diào)查問卷收集一般基線資料,通過超聲心動圖檢查左室結(jié)構(gòu)及功能的超聲指標,采用Taq Man-MGB法進行人群中SNPs位點的檢測。主要通過對比6個標簽SNPs位點不同基因型之間各項超聲指標的差異,并通過多元回歸分析對可能影響左室結(jié)構(gòu)、功能的因素進行校正,分析Mfn2基因多態(tài)性位點與左室結(jié)構(gòu)及功能之間的相關(guān)性。結(jié)果1.1Mfn2基因的SNP位點rs2236384,rs2236058和rs3766741基因型和等位基因頻率分布在高血壓組和對照組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而SNP位點rs2295281,rs17037564和rs2236057基因型和等位基因頻率分布在高血壓組和對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2校正協(xié)變量后,Logistic回歸結(jié)果顯示:rs2336384與EH發(fā)病風(fēng)險在加性(OR=1.273,95%CI[1.023-1.584],P=0.031)及顯性遺傳模型(OR=1.617,95%CI[1.155-2.264],P=0.005)下顯著相關(guān);rs2236057與EH發(fā)病風(fēng)險在顯性遺傳模型(OR=1.418,95%CI[1.033-1.948],P=0.031)下顯著相關(guān);rs2236058與EH發(fā)病風(fēng)險在加性(OR=0.802,95%CI[0.649-0.991],P=0.041)及隱性遺傳模型(OR=0.662,95%CI[0.463-0.946],P=0.023)下顯著相關(guān);rs3766741與EH發(fā)病風(fēng)險在顯性遺傳模型下(OR=0.639,95%CI[0.433-0.943],P=0.024)顯著相關(guān)。rs2295281和rs17037564與EH發(fā)病相關(guān)性無統(tǒng)計學(xué)意義。3性別亞組分析顯示:在男性亞組中,rs2336384與EH發(fā)病風(fēng)險在加性(OR=1.407,95%CI[1.005-1.97],P=0.047)及顯性遺傳模型(OR=1.89,95%CI[1.63-3.071],P=0.01)下顯著相關(guān);rs2236057與EH發(fā)病風(fēng)險在顯性遺傳模型(OR=1.665,95%CI[1.052-2.635],P=0.03)下顯著相關(guān);rs2236058與EH發(fā)病風(fēng)險在隱性遺傳模型(OR=0.576,95%CI[0.342-0.967],P=0.05)相關(guān)。而在女性人群中均未發(fā)現(xiàn)Mfn2基因SNP位點與EH發(fā)病風(fēng)險存在相關(guān)性。4Mfn2基因rs2336384、rs2295281、rs17037564、rs2236057、rs2236058和rs3766741位點之間存在密切的連鎖不平衡關(guān)系。單倍型分析總共發(fā)現(xiàn)5種單倍型組合,經(jīng)過校正協(xié)變量的logistic回歸分析結(jié)果顯示C-C-A-A-C-C(rs2336384-rs2295281-rs17037564-rs2236057-rs2236058-rs3766741)增加高血壓發(fā)病風(fēng)險(OR=1.24,P=0.047);而A-C-A-G-G-G(rs2336384-rs2295281-rs17037564-rs2236057-rs2236058-rs3766741)單倍型攜帶者比非攜帶者罹患高血壓的風(fēng)險降低(OR=0.642,P=0.024);未發(fā)現(xiàn)其他單倍型與高血壓發(fā)病風(fēng)險存在相關(guān)性。2.1Ridit檢驗結(jié)果提示:Mfn2基因各SNP位點不同基因型間ACEI降壓藥物療效差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);2非參數(shù)檢驗結(jié)果顯示:Mfn2基因各SNP位點不同基因型間ACEI降壓藥物降壓幅度(△SBP、△DBP)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);3采用多元線性回歸對可能影響ACEI藥物的因素(年齡、性別、BMI、基礎(chǔ)血壓)進行校正后未發(fā)現(xiàn)Mfn2基因各SNP位點不同基因型與ACEI降壓藥降壓幅度之間存在相關(guān)性(P0.05)3.1Mfn2基因6個SNP位點在本研究人群中的分布符合Hardy-Weinberg平衡。本研究所入選的新發(fā)輕到中度原發(fā)性高血壓患者人群中,僅有22例患者出現(xiàn)了左室肥厚,其中男性9例,女性13例(男性LVMI134g/m2或女性LVMI110g/m2);2Mfn2基因6個SNP位點各基因型間超聲指標(LVEDD、LVESD、IVST、PWT、RWT、LVM、LVMI、EF、LA、E/A)的對比結(jié)果顯示:代表左室肥厚及功能的各項超聲指標在Mfn2基因6個SNP位點各基因型間未發(fā)現(xiàn)有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);3經(jīng)多元線性回歸分析校正年齡、性別、BMI、SBP及DBP等因素后,未發(fā)現(xiàn)Mfn2基因多態(tài)性位點與左室結(jié)構(gòu)及功能超聲指標間存在相關(guān)性(P0.05)。結(jié)論1.Mfn2基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓(EH)顯著相關(guān)。rs2336384位點的C等位基因攜帶者和rs2236057位點的A等位基因攜帶者高血壓發(fā)病風(fēng)險增加;而rs2236058的GG基因型攜帶者和rs3766741的G等位基因攜帶者高血壓發(fā)病風(fēng)險降低;rs2336384、rs2236057及rs2236058多態(tài)性位點與EH發(fā)病風(fēng)險相關(guān)性僅見于男性人群,在女性人群中未發(fā)現(xiàn)其相關(guān)性;未發(fā)現(xiàn)rs2295281及rs17037564與我國北方漢族人群EH發(fā)病風(fēng)險相關(guān);Mfn2基因rs2336384、rs2295281、rs17037564、rs2236057、rs2236058和rs3766741位點之間存在緊密連鎖不平衡;C-C-A-A-C-C單倍型可增加高血壓發(fā)病風(fēng)險,而A-C-A-G-G-G單倍型為罹患EH的保護因素。2.Mfn2基因SNP位點與ACEI類降壓藥物(貝那普利)的降壓療效之間不存在相關(guān)性,尚不能作為臨床個體化使用ACEI類降壓藥物的遺傳標志物,該結(jié)果仍需進一步在大樣本人群及更長隨訪時間的研究中進行驗證。3.Mfn2基因上的6個標簽單核苷酸多態(tài)性位點(rs2236384,rs2295281,rs17037564,rs2236057,rs2236058及rs3766741)與代表左室結(jié)構(gòu)及功能的超聲指標在中國北方漢族人群中無明顯相關(guān)性,該結(jié)果尚需進一步在不同人群的大樣本研究中證實。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：首都醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
，

本文編號：1632349