本文選題：乙酰膽堿受體α亞基基因　切入點(diǎn)：基因表達(dá)拷貝數(shù)　出處：《生物技術(shù)》2017年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：[目的]為研究乙酰膽堿受體(nicotine acetylcholine receptor,nAChR)α9亞基基因(CHRNA9)的mRNA,在人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和人正常乳腺上皮細(xì)胞系MCF-10A中的差異表達(dá)情況,建立了CHRNA9基因轉(zhuǎn)錄本拷貝數(shù)的絕對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線。[方法]培養(yǎng)并收集細(xì)胞,提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板,擴(kuò)增CHRNA9基因171bp的特征片段,亞克隆到pMD-18T載體中,并進(jìn)行測(cè)序鑒定。以梯度稀釋的質(zhì)粒為模板,進(jìn)行熒光定量PCR來(lái)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)一步對(duì)上述細(xì)胞系中CHRNA9的初始拷貝數(shù)進(jìn)行定量分析。[結(jié)果]成功地對(duì)人正常乳腺上皮細(xì)胞系MCF-10A,人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中的α9 nAChR亞基基因的mRNA水平表達(dá)量,即反轉(zhuǎn)錄生成的cDNA拷貝數(shù)進(jìn)行了定量,mRNA拷貝數(shù)分別為712.61.31和2 236.55個(gè)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,二者之間CHRNA9基因的表達(dá)量差異達(dá)到了極顯著水平(p0.01),即α9 nAChR亞基基因在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中顯著高于乳腺正常上皮細(xì)胞MCF-10A。[結(jié)論]研究所獲得的CHRNA9基因的絕對(duì)熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線,可用于不同乳腺癌細(xì)胞系α9 nAChR亞基基因表達(dá)量的檢測(cè),而α9 nAChR作為一個(gè)理想的、特異性的潛在藥物作用靶點(diǎn),這為相應(yīng)種類的乳腺癌發(fā)病機(jī)理研究和靶向治療藥物的研發(fā)提供基礎(chǔ)。
[Abstract]:[objective] to study the mRNA expression of the 偽 9 subunit of acetylcholine acetylcholine receptor nAChR9 in human breast cancer cell line MCF-7 and normal mammary epithelial cell line MCF-10A. The absolute quantitative standard curve of copy number of CHRNA9 gene transcripts was established. [methods] cells were cultured and collected, total RNAs were extracted, and cDNAs were synthesized by reverse transcription. Using cDNA as template, the 171bp characteristic fragment of CHRNA9 gene was amplified and subcloned into pMD-18T vector. Using gradient dilution plasmid as template, fluorescence quantitative PCR was used to establish the standard curve. The initial copy number of CHRNA9 in human breast epithelial cell line MCF-10A and the mRNA level of 偽 9 nAChR subunit gene in human breast cancer cell line MCF-7 were analyzed quantitatively. That is, the copy number of cDNA produced by reverse transcription was 712.61.31 and 2236.55 respectively. The difference of expression of CHRNA9 gene between the two groups reached a very significant level, that is, 偽 9 nAChR subunit gene in breast cancer cell MCF-7 was significantly higher than that in normal breast epithelial cell line MCF-10A. [conclusion] the absolute fluorescence quantitative standard curve of CHRNA9 gene obtained from the study was higher than that of normal breast epithelial cell line MCF-10A. It can be used to detect the expression of 偽 9 nAChR subunit gene in different breast cancer cell lines, and 偽 9 nAChR is an ideal and specific potential drug target. This provides the basis for the study of the pathogenesis of breast cancer and the development of targeted therapy drugs.
【作者單位】： 海南大學(xué)熱帶生物資源教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、�？谑泻Ｑ笏幬镏攸c(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;海南大學(xué)熱帶農(nóng)林學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“作用于α9α10乙酰膽堿受體的新穎芋螺毒素結(jié)構(gòu)與功能的研究”,No.81420108028) 長(zhǎng)江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(“熱帶特色海洋藥物芋螺毒素資源的研究與利用”,No.IRT_15R15) 海南省普通高等學(xué)校研究生創(chuàng)新科研課題(“芋螺毒素抗乳腺癌活性及作用機(jī)制的初步研究”,No.Hyb2016-08)
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：1629854